哮喘小鼠骨髓樹(shù)突狀細(xì)胞的表型及共刺激分子研究論文

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1、哮喘小鼠骨髓樹(shù)突狀細(xì)胞的表型及共刺激分子研究論文.freelGMCSF和rmIL-4體外誘導(dǎo)骨髓細(xì)胞分化為DCs，流式細(xì)胞儀檢測(cè)DCs表面共刺激分子的表達(dá)，混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)檢測(cè)DCs刺激同種異體的T淋巴細(xì)胞增殖的能力。結(jié)果在兩種細(xì)胞因子的作用下，從骨髓中可以誘導(dǎo)出大量的DCs；且均表達(dá)DCs的表面標(biāo)志(33D1)。哮喘組DCs表達(dá)CD86分子的水平高于對(duì)照組，而CD40、CD80在兩組之間沒(méi)有差異；哮喘組與對(duì)照組DCs均能強(qiáng)烈刺激同種異體T淋巴細(xì)胞的增殖，哮喘組DCs的刺激能力明顯強(qiáng)于對(duì)照組。結(jié)論哮喘組DCs的抗原遞呈能力增強(qiáng)，表明DCs在哮喘的發(fā)病中可能起著重要作用。【關(guān)鍵詞】哮喘；

2、樹(shù)突狀細(xì)胞；B7；CD40；混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)ThestudyofphenotypesandcostimulatorymoleculesofdendriticcellsinasthmaticmiceethodsMurinemodelofovalbumin(OVA)allergicasthmaarroIL-4andgranulocyte-macrophagecolonystimulatingfactor.Phenotypeetry，andtheantigenpresentingfunctionixedleukocytereaction.ResultsDCsexpressedDCscha

3、racteristic33D1canbedevelopedfrombonemarroIL-4andrmGMCSF.ThestimulatingeffectoftheDCsontheproliferationofthelymphocytesaticandcontrolgroup，buttheeffectinasthmaticgrouporeintensivethancontrol.DCsfromasthmaticmiceshoaticandcontrolledgroup.ConclusionThisstudysuggeststheantigenpresentingfunctionofD

4、Csinasthmaticgroupayplayanimportantroleinthepathogenesisofasthma.【Keya;dendriticcells;B7;CD40;mixedleukocytereaction哮喘是一種以嗜酸性細(xì)胞(Eos)、T淋巴細(xì)胞和肥大細(xì)胞浸潤(rùn)、氣道破壞及氣道高反應(yīng)(AHR)為特點(diǎn)，并且有多種炎性介質(zhì)參與作用的慢性氣道炎癥性疾病?；罨腃D4+T細(xì)胞（Th2）是主要的效應(yīng)細(xì)胞。越來(lái)越多的研究提示共刺激分子B7.1(CD80)與B7.2（CD86）等在免疫反應(yīng)中起重要作用［1，2］。樹(shù)突狀細(xì)胞（dendriticcells，DCs）是功能最強(qiáng)的

5、專職抗原遞呈細(xì)胞（antigen-presentingcells，APCs），是目前發(fā)現(xiàn)的唯一能在體外直接激活初始T細(xì)胞的APCs，因此DCs成為研究APCs與T細(xì)胞相互作用的橋梁和焦點(diǎn)。本研究旨在探討哮喘小鼠骨髓樹(shù)突狀細(xì)胞表面分子的表達(dá)及其對(duì)淋巴細(xì)胞的刺激作用。1材料與方法1.1動(dòng)物BALB/C小鼠，4～6周，雄性，購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。ICR小鼠，6~8周，雄性，購(gòu)自江蘇省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。1.2細(xì)胞因子與抗體重組小鼠粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子（rmGM-CSF）和重組小鼠白細(xì)胞介素-4（rmIL-4）（R＆Dsystem）；FITCantiMouseCD86、FITCan

6、tiMouseCD80、FITCantiMouseCD40及AntiMouseDCMarker33D1（eBioscience）；FITCGoatantiRatIgG（H+L）（北京中山生物公司）。1.3主要試劑卵清蛋白（OVA，GradeⅡ）（Sigma）；RPMI1640培養(yǎng)基(含L-谷氨酸，不含NaHCO3)（GIBCO）；胎牛血清(FCS)（Hyclone）；絲裂霉素C（Kaoa）；CellTiter96AQueousOneSolutionCellProliferationAssay(MTS)（Promega）。其他試劑為國(guó)產(chǎn)分析純。1.4方法1.4.1小鼠哮喘模型的建

7、立參照文獻(xiàn)［3］。20只小鼠隨機(jī)分為兩組，每組10只，在第1、8天腹腔注射OVA混懸液0.1ml［含OVA10mg，Al(OH)320mg］，14天后以1%OVA超聲霧化（S-888E型超聲霧化器）吸入，每次30min，持續(xù)2周，直至出現(xiàn)呼吸急促，腹肌抽搐，煩躁不安等癥狀，為哮喘的陽(yáng)性反應(yīng)。正常對(duì)照組不做任何干預(yù)處理，正常飼養(yǎng)。1.4.2骨髓DCs的分離培養(yǎng)參照文獻(xiàn)方法［4］，略有改動(dòng)。拉頸處死BALB/C小鼠，無(wú)菌剝離股骨和脛骨。