中藥及其活性成分基因轉(zhuǎn)錄水平機(jī)理研究進(jìn)展

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1、中藥及其活性成分基因轉(zhuǎn)錄水平機(jī)理研究進(jìn)展【關(guān)鍵詞】中藥；活性成分；基因轉(zhuǎn)錄水平；機(jī)理研究；綜述千百年來,在中醫(yī)藥理論指導(dǎo)下,無論單味還是復(fù)方中藥,在臨床實(shí)踐中不斷地得到驗(yàn)證是有良效的,且在臨床適用的范圍篩選出有顯效的活性單體成分的事例也屢見不鮮。但中藥的作用機(jī)理研究如同藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究一樣,是中藥基礎(chǔ)研究的一個(gè)瓶頸,其中一個(gè)重要原因是中藥特別是中藥復(fù)方的成分復(fù)雜,很難找到有效的研究手段。近年來,分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展使得從基因轉(zhuǎn)錄水平研究中藥的作用機(jī)理成為可能。筆者根據(jù)近10年來中藥基因轉(zhuǎn)錄水平機(jī)理研究的文獻(xiàn)報(bào)道,對這方面的國內(nèi)外進(jìn)展綜述如下。　　1中藥活性成分基因轉(zhuǎn)錄水平

2、機(jī)理研究　　中藥活性單體成分或有效部位由于成分較單一,便于實(shí)驗(yàn)及得出明確的結(jié)論等,有關(guān)的機(jī)理研究報(bào)道相對較多。如生物堿類的研究。川芎嗪是中藥川芎的主要活性成分之一,史氏等[1]和SongJianxin等[2]分別采用RNA印跡技術(shù)(Northernblot)研究其對心肌細(xì)胞缺氧缺糖損傷的保護(hù)作用和抗血栓機(jī)制,前者表明,川芎嗪可顯著促進(jìn)缺氧缺糖心肌細(xì)胞一氧化氮合酶(NOS)mRNA的表達(dá),對心肌細(xì)胞缺氧缺糖損傷有較好的保護(hù)作用；后者顯示,川芎嗪抑制內(nèi)皮細(xì)胞基礎(chǔ)的和脂多糖(LPS)誘導(dǎo)的纖溶酶原激活抑制因子表達(dá),促進(jìn)纖溶作用。此外,LiZesong等[3]用自制的心血管疾病相

3、關(guān)基因的低密度寡核苷酸微陣列來研究川芎嗪的分子機(jī)制,實(shí)驗(yàn)表明,川芎嗪使人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的鈣-ATP酶基因、鈉通道基因、細(xì)胞色素P450c11基因表達(dá)上調(diào),載脂蛋白C-Ⅲ基因下調(diào),與反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)的結(jié)果一致。對苷及苷元類的研究也有相關(guān)報(bào)道,曹氏等[4-5]通過斑點(diǎn)雜交法(dotblot)分別觀察商陸塊根的有效成分商陸皂苷辛(EH)和淫羊藿中的淫羊藿苷(ICA)對小鼠脾淋巴細(xì)胞白細(xì)胞介素(IL)-3mRNA和IL-6mRNA表達(dá)水平的影響,結(jié)果顯示,EH和ICA都促進(jìn)了伴刀豆球蛋白A誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞IL-3mRNA及IL-6mRNA表達(dá),提示這些細(xì)

4、胞因子基因轉(zhuǎn)錄水平提高進(jìn)而表達(dá)產(chǎn)物增加是其免疫調(diào)節(jié)和提高造血功能的分子機(jī)制之一。JiaHongxiao等[6]為了弄清細(xì)葉遠(yuǎn)志皂苷元改善淀粉樣β蛋白(Aβ)誘導(dǎo)的大鼠模型的膽堿能功能減退的分子機(jī)制,采用RT-PCR和熒光共振能量轉(zhuǎn)移等技術(shù)分別考察了對淀粉樣前體蛋白(APP)mRNA表達(dá)和對β-分泌酶蛋白水解活性的影響,結(jié)果是細(xì)葉遠(yuǎn)志皂苷元并沒影響APPmRNA表達(dá)、全長APP合成或APPα-分泌酶的分泌,而是在體外抑制了β-分泌酶對其底物的蛋白水解活性,從而抑制Aβ的分泌。)1亞型基因的中國倉鼠卵巢細(xì)胞的M1基因表達(dá),結(jié)果顯示,伴隨升高的M1mRNA水平,M1受體數(shù)呈濃度

5、依賴式上調(diào),從而人參醇有望代替化學(xué)合成的M1受體激動(dòng)劑治療阿爾茨海默病(AD)。對酚酸類化合物的研究報(bào)道有,LuoLB)對缺氧/復(fù)氧下的內(nèi)皮細(xì)胞NOS表達(dá)水平的影響,結(jié)果表明,MLB抑制了缺氧/復(fù)氧誘導(dǎo)的內(nèi)皮型NOSmRNA表達(dá),刺激了誘導(dǎo)型NOSmRNA的表達(dá)和NO的釋放,減輕了內(nèi)皮細(xì)胞損傷,提示細(xì)胞損傷減輕與NO的釋放增加有關(guān)。此外,對多糖的研究也有相關(guān)文獻(xiàn)資料,陳氏等[9]應(yīng)用RT-PCR觀察了枸杞多糖對小鼠骨髓原癌基因c-myc表達(dá)的影響,結(jié)果顯示,老年小鼠和衰老模型小鼠骨髓原癌基因c-myc表達(dá)量明顯高于青年小鼠和正常對照小鼠,給藥后則可明顯得到抑制。因而,推測

6、抑制原癌基因c-myc表達(dá)是枸杞多糖抗衰老分子機(jī)理之一。　　2單味中藥基因轉(zhuǎn)錄水平機(jī)理研究　　單味中藥的機(jī)理研究報(bào)道相對較少。韓氏等[10]應(yīng)用Northernblot觀察海風(fēng)藤對人類神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系列β-APP基因表達(dá)的抑制作用,結(jié)果發(fā)現(xiàn),海風(fēng)藤選擇性地抑制β-APP基因表達(dá),為其防治AD提供了一定的依據(jù)。蔡氏等[11]通過用RT-PCR檢測雌激素受體(ER)α和βmRNA表達(dá)量,考察了補(bǔ)腎陽中藥淫羊藿和補(bǔ)腎陰中藥女貞子對雄性大鼠杏仁核和皮質(zhì)頂葉ERmRNA的調(diào)節(jié)表達(dá)差異,結(jié)果顯示,兩用藥組大鼠杏仁核、皮質(zhì)頂葉ERαmRNA表達(dá)量無明顯變化,ERβmRNA表達(dá)量都上調(diào)

7、,且淫羊藿組高于女貞子組,說明補(bǔ)腎中藥的作用機(jī)制之一可能是通過調(diào)節(jié)ERβ來發(fā)揮作用。王氏等[12]用自制的包含24個(gè)細(xì)胞周期相關(guān)基因的cDNA微陣列,對抑制肝癌細(xì)胞增殖的4種中藥烏藥、青蒿、紫草和黃芪的抗腫瘤分子機(jī)制研究表明,4種中藥對細(xì)胞周期基因和損傷檢測點(diǎn)基因均有不同程度改變,表現(xiàn)為部分上調(diào),部分下調(diào),為其治療癌癥的研究提供了可供參考的分子生物學(xué)依據(jù)。　　3中藥復(fù)方基因轉(zhuǎn)錄水平機(jī)理研究　　李氏等[13]采用dotblot和原位雜交技術(shù),研究血管通對動(dòng)脈粥樣硬化(AS)家兔血管壁血小板衍化生長因子(PDGF)-A、B及c-m