hplc法測定復(fù)方石韋顆粒中苦參堿含量

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1、HPLC法測定復(fù)方石韋顆粒中苦參堿含量【摘要】目的建立HPLC法測定苦參堿含量的方法。方法以反相高效液相法測定苦參堿的含量。色譜柱：HanbonLichrospher(250mm×4.6mm，5μm)；流動相：乙腈-0.1%三氟醋酸（5:95）；檢測波長：205nm；結(jié)果苦參堿在0.2～1.0μg濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好；（r＝0.9998，n=5）平均加樣回收率為100.02%，RSD為1.24%。結(jié)論該方法快速，簡便，準(zhǔn)確，重復(fù)性好?！娟P(guān)鍵詞】復(fù)方石韋顆粒;苦參堿;HPLC法復(fù)方石韋顆粒是《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第十五冊》收載的片劑劑改品種。由

2、石韋、黃芪、苦參、?蓄四味藥組成。復(fù)方石韋顆粒具有清熱燥濕，利尿通淋。用于小便不利，尿頻，尿急，尿痛，下肢浮腫等癥。也可用于急慢性腎小球腎炎，腎盂腎炎，膀胱炎，尿道炎[1-2]?？鄥A為其主要成分，因此把苦參堿的含量作為復(fù)方石韋顆粒的質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)。1儀器與試藥1.1儀器與試藥美國Waters-515型高效液相色譜儀；色譜柱：HanbonLichrospher（250mm×4.6mm，5μm）；檢測器：Waters-2487紫外檢測器；Empower色譜工作站。1.2苦參堿對照品（中國藥品生物制品檢定所編號5110805-200306）；復(fù)方石韋顆粒（廠家

3、提供）；乙腈均為色譜純（默克公司），其余試劑均為分析純。2實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果2.1色譜條件的選擇色譜柱：HanbonLichrospher(250mm×4.6mm，5μm)；流動相：乙腈-0.1%三氟醋酸（5:95）；檢測波長：205nm；流速：1.0ml/min；進(jìn)樣體積：10μL；柱溫：35℃。該條件下苦參堿與其他組分均能達(dá)到基線分離，陰性對照樣品在苦參堿色譜峰的保留時間處無干擾，結(jié)果見圖1。2.2對照品溶液的制備精密稱取苦參堿對照品10.04mg，置100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，再精密量取50ml，置100ml量瓶中，加甲醇稀釋至

4、刻度，搖勻，即得（含苦參堿50.2μg/ml）。2.3供試品溶液的制備取本品，研細(xì)，取約1g，精密稱定，加濃氨試液1ml使浸潤，再精密加氯仿25ml，密塞，稱定重量，超聲處理30min，放冷，用氯仿補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液10ml，置水浴上蒸干，殘?jiān)蛹状歼m量使溶解，移置10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。2.4檢測波長的選擇取苦參堿對照品的甲醇溶液，置紫外分光光度計中，在190～350nm的波長范圍內(nèi)進(jìn)行光譜掃描，結(jié)果苦參堿在2055nm的波長處有最大吸收，故將本品的檢測波長定為205nm。2.5線性關(guān)系考察分別精密吸取

5、對照品溶液2、4、6、8、10μl進(jìn)樣，記錄色譜峰面積，以苦參堿濃精密吸取濃度為100.4μg/ml的苦參堿對照品溶液2、4、6、8、10ml，分別置10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，精密吸取10μl進(jìn)樣，測定其峰面積積分值，以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積積分值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，其回歸方程為：Ａ＝562878×Ｃ－4448，r＝0.9998。結(jié)果表明苦參堿在0.2～1.0μg范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。2.6精密度試驗(yàn)精密吸取同一份供試品溶液（批號20030524）10μl，重復(fù)進(jìn)樣5次，測定其峰面積積分值，RSD為0.21%。結(jié)果表明：本方法精密

6、度良好。2.7重現(xiàn)性試驗(yàn)取同一批號樣品（批號20030524）5份，按上述條件依法平行處理并測定含量（n=2），測定其峰面積積分值，RSD為1.43%。結(jié)果表明：本方法重現(xiàn)性好。2.8穩(wěn)定性試驗(yàn)分別精密吸取同一份供試品溶液（批號20030524）10μl，于0、3、6、9、12h進(jìn)樣，測定其峰面積積分值，RSD為0.37%。結(jié)果表明，供試品溶液在12h內(nèi)峰面積值基本穩(wěn)定。2.9回收率試驗(yàn)精密稱取已知含量為1.6093mg/g5（批號20030524）樣品0.5g，共5份，分別精密加入苦參堿對照品溶液（50.20μg/mL）15ml，即0.753mg，

7、揮去甲醇，再按上述含量測定項(xiàng)下的方法測定含量，結(jié)果見表1。取苦參藥材細(xì)粉約2g，照供試品溶液制備法依法測定，3批苦參藥材中的苦參堿含量測定結(jié)果見表3，為保證產(chǎn)品的質(zhì)量，規(guī)定投料藥材苦參中苦參堿的含量應(yīng)不得少于0.080%。3討論3.1本品藥味較多，成分復(fù)雜，本文對HPLC分析時的流動相系統(tǒng)組成和比例作了比較，對多種溶劑系統(tǒng)進(jìn)行選擇，采用乙腈－二乙胺，乙腈－0.1%三氟醋酸溶液等系統(tǒng)比較，根據(jù)分離情況，選用乙腈－三氟醋酸溶液(5：95)測定苦參堿含量，可使峰形變窄，提高分離度[3]。3.2考察提取工藝時，采用超聲提取法，考察了甲醇、70%乙醇、2%醋酸

8、水溶液和氯仿的提取效率，結(jié)果表明：氯仿對苦參堿的提取效率最高，又考察了氯仿超聲和浸漬提取方法，研究表明:超聲