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《家兔血漿中龍膽苦苷濃度的高效液相色譜測(cè)定論文》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線(xiàn)閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、家兔血漿中龍膽苦苷濃度的高效液相色譜測(cè)定論文趙淑紅，蔣袁絮，馬學(xué)琴，高亦瓏，楊光，李記諍，馬琳，余建強(qiáng)【摘要】目的建立家兔血漿中龍膽苦苷的HPLC檢測(cè)方法,研究秦艽中龍膽苦苷在家兔體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)規(guī)律。方法以秦艽水煎醇沉液家兔耳靜脈注射后定時(shí)取血,色譜條件:SHIM-PACKVP-ODS色譜柱(150mm×4.6mm,5μm);流動(dòng)相:甲醇-乙腈-水（5∶10∶85）;檢測(cè)波長(zhǎng):271nm;流速:1.0ml·min-1.freell-1范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好(r=0.9995),最低定量濃度為0.0342μg·ml-1。
2、日內(nèi)、日間精密度均小于10﹪,回收率為89.8﹪～101.4.3﹪。藥-時(shí)曲線(xiàn)符合三房室模型，主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)：Tmax=0.083h，Cmax=45.1mg·L-1，V=1.312L·kg-1，CL=0.761L·h-1·kg-1，t1/2=1.195h,AUC(0～∞)=30.78mg·L-1·h-1。結(jié)論該方法具有準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便、快速的特點(diǎn),可用于秦艽中龍膽苦苷的檢測(cè)?！娟P(guān)鍵詞】龍膽苦苷；高效液相色譜法；血藥濃度；藥動(dòng)學(xué)秦艽作為一種常用的傳統(tǒng)中藥,野生品種早已不能滿(mǎn)足臨床需要，栽培秦艽開(kāi)發(fā)利用尚處于起步階段，對(duì)其的研
3、究多見(jiàn)于化學(xué)成分及藥效學(xué)方面，少有對(duì)藥動(dòng)學(xué)的研究。有報(bào)道龍膽苦苷在Beagle犬體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)過(guò)程表現(xiàn)為靜脈內(nèi)給藥一房室模型［1］;大鼠灌胃給予含龍膽苦苷藥物后［2］；用HPLC法測(cè)定龍膽苦苷呈靜脈外給藥的二房室模型。龍膽苦苷是裂環(huán)烯醚萜苷類(lèi)化合物，極性大，吸收較少，靜脈外給藥其血藥濃度均較低。為此本實(shí)驗(yàn)選擇兔耳靜脈注射秦艽水煎醇沉液，用HPLC法定量測(cè)定家兔體內(nèi)龍膽苦苷的藥動(dòng)學(xué)過(guò)程。1材料與儀器1.1藥品三年生栽培秦艽采于寧夏六盤(pán)山藥材栽培基地(由寧夏六盤(pán)山藥材栽培基地張守宗高級(jí)農(nóng)藝師提供)，經(jīng)寧夏藥檢所邢世瑞主任藥
4、師鑒定原植物為秦艽GentianamacrophyllaPall.的生藥材；按中藥制劑藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)的常規(guī)制備方法制備秦艽水煎醇沉液1.0g/ml（以生藥計(jì)），于冰箱內(nèi)冷藏保存。1.2試劑與藥物龍膽苦苷對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢測(cè)定所，批號(hào)：770-200105）。乙腈、甲醇（美國(guó)TEDIA，色譜純），水為去離子水，其余試劑均為分析純。1.3儀器日本島津LC-20A系列高效液相色譜儀(包括LC-20AT輸液泵、DGU-20A5在線(xiàn)、脫氣機(jī)、SPD-20AV紫外檢測(cè)器、SCL-20Avp系統(tǒng)控制器、LC-solution色
5、譜工作站)。Explorer電子分析天平(OhausCorporation，美國(guó))；UV-2550型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(日本島津公司)；高速臺(tái)式離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠）。1.4動(dòng)物家兔1.5～2.5kg，普通級(jí),由寧夏醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。2方法與結(jié)果2.1色譜條件色譜柱為SHIM-PACKVP-ODS（150mm×4.6mm,5μm）;流動(dòng)相為甲醇-乙腈-水（5∶10∶85）；檢測(cè)波長(zhǎng)271nm；流速1.0ml·min-1。2.2系列對(duì)照品溶液的配制精密稱(chēng)取龍膽苦苷對(duì)照品0.00683g至5ml容量瓶中,甲
6、醇溶解，定容至刻度,得濃度為1.366mg·ml-1標(biāo)準(zhǔn)貯備液，分別稀釋成6種不同濃度的系列對(duì)照品溶液，密封、低溫、避光保存?zhèn)溆谩?.3血清樣品的預(yù)處理微量移液器吸取經(jīng)預(yù)處理的兔血清200μl于2ml離心管中，加600μl甲醇沉淀蛋白，于渦旋混合器上充分混合30s，離心（16000r·min-1）10min，取上清液，經(jīng)0.22μm的微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液10μl進(jìn)樣得色譜圖1。空白血清在5min之前有色譜峰，5min后再無(wú)色譜峰出現(xiàn)。在相同的HPLC流動(dòng)相條件下，與龍膽苦苷對(duì)照品的保留時(shí)間相比較，確認(rèn)龍膽苦苷樣品，
7、在上述色譜條件下分離良好，空白血漿內(nèi)源性物質(zhì)無(wú)干擾。2.4HPLC法測(cè)定秦艽中龍膽苦苷血藥濃度2.4.1對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)制作取空白血清，加入標(biāo)準(zhǔn)品的血清溶液，配置成6種所需不同濃度的系列標(biāo)準(zhǔn)血清樣品，依照“血清預(yù)處理”項(xiàng)下操作后測(cè)定峰面積，以龍膽苦苷的濃度為橫坐標(biāo)，以測(cè)得的相應(yīng)峰面積為縱坐標(biāo)，用最小二乘法進(jìn)行線(xiàn)性回歸。得回歸方程A＝7922.7C＋456.52，R2＝0.9995，線(xiàn)性范圍0.683～136.6μg·ml-1，最低定量濃度為0.0342μg·ml-1。見(jiàn)圖2。2.4.2回收率實(shí)驗(yàn)精密移取200μl空白血
8、清，加入標(biāo)準(zhǔn)品的血清溶液，配制成高、中、低濃度3組各5份，照“2.3”項(xiàng)下操作,.freell/kg耳靜脈注射給藥。給藥前取空白血清，給藥后分別在0.08，0.25，0.5，0.75，1，1.5，2，4，6，8h經(jīng)耳中動(dòng)脈取血，約1ml/次，置于具塞離心管中，靜置10min后，以3000r/min離心10min，分離血清，在低溫冰箱冷凍保存至測(cè)
