正交試驗(yàn)法優(yōu)選烏拉爾甘草總黃酮提取工藝研究

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1、正交試驗(yàn)法優(yōu)選烏拉爾甘草總黃酮提取工藝研究[摘要]：目的：用正交法研究提取甘草中的甘草總黃酮類化合物最佳提取工藝。方法：選取乙醇濃度、提取時(shí)間、提取溫度、料液比及提取次數(shù)進(jìn)行單因素試驗(yàn)，采用正交法，以甘草總黃酮類化合物得率作為檢測(cè)指標(biāo)。結(jié)果：經(jīng)過正交試驗(yàn)得出的最佳工藝條件為：乙醇濃度80%，料液比1:20，提取時(shí)間2h，提取溫度70℃，回流提取次2次。結(jié)論：該方法提取率高，穩(wěn)定性好，操作簡(jiǎn)便，適合工業(yè)化生產(chǎn)。關(guān)鍵詞：甘草總黃酮正交試驗(yàn)提取工藝吸光度正交試驗(yàn)法優(yōu)選烏拉爾甘草總黃酮提取工藝研究[摘要]：目的：用正交法研究提取甘草中的甘草總黃酮類化合物最佳提取工藝。方法：

2、選取乙醇濃度、提取時(shí)間、提取溫度、料液比及提取次數(shù)進(jìn)行單因素試驗(yàn)，采用正交法，以甘草總黃酮類化合物得率作為檢測(cè)指標(biāo)。結(jié)果：經(jīng)過正交試驗(yàn)得出的最佳工藝條件為：乙醇濃度80%，料液比1:20，提取時(shí)間2h，提取溫度70℃，回流提取次2次。結(jié)論：該方法提取率高，穩(wěn)定性好，操作簡(jiǎn)便，適合工業(yè)化生產(chǎn)。關(guān)鍵詞：甘草總黃酮正交試驗(yàn)提取工藝吸光度甘草為雙子葉植物豆科甘草，脹果甘草，或光果甘草的根及根莖。始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為上品。甘草性平，味甘，歸十二經(jīng)。有解毒、祛痰、止痛、解痙以至抗癌等藥理作用。在中醫(yī)上，甘草補(bǔ)脾益氣，滋咳潤肺，緩急解毒，調(diào)和百藥。臨床應(yīng)用分“生用”與“蜜炙

3、”之別。生用主治咽喉腫痛，痛疽瘡瘍，胃腸道潰瘍以及解藥毒、食物中毒等；蜜炙主治脾胃功能減退，大便溏薄，乏力發(fā)熱以及咳嗽、心悸等。甘草是我國傳統(tǒng)常用中草藥之一，也是我國重要的植物資源[1]第7頁。甘草黃酮類成分是甘草中最重要的活性成分之一，具有抗氧化、抗腫瘤、增強(qiáng)心血管功能、增強(qiáng)免疫力等作用[2-5]。1．儀器與試劑2材料與方法3結(jié)果與分析4結(jié)論與討論2.1材料烏拉爾甘草，粉碎，待用。對(duì)照品，蘆丁。乙醇、亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉等，均國產(chǎn)分析純?cè)噭?.2儀器FZ102五星植物試樣粉碎機(jī)（北京永光明醫(yī)療儀器廠）、DZKW-4型雙列六孔水浴鍋（北京中興偉業(yè)儀器有限公司

4、）、T6新悅-可見分光光度計(jì)（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司）、SHB-3循環(huán)水多用真空泵（鄭州杜甫儀器廠）、FA1604N電子天平（上海精科儀器廠）、回流裝置、圓底燒瓶、燒杯、濾紙、玻璃棒、滴管等。3.方法與結(jié)果3.1總黃酮的含量測(cè)定以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)品，利用紫外分光光度法測(cè)定待測(cè)樣品總黃酮含量。[6~8]3.1.1對(duì)照品溶液的制備稱取蘆丁對(duì)照品10mg，用95%的乙醇溶解，搖勻，定容至10ml，使之成為濃度為1mg/ml的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品溶液，作為貯備液備用。3.1.2供試品溶液的制備稱取烏拉爾甘草若干，粉碎，過40目篩，稱取粉碎樣2.0g，置于250ml平底燒瓶，采用乙醇回

5、流法提?。ㄌ崛∪軇?0%乙醇、液料比為1:20、提取溫度為70℃、提取時(shí)間為2h、提取2次）。提取液抽濾、轉(zhuǎn)至25ml容量瓶，定容，搖勻，待測(cè)。3.1.3比色原理及最大吸收波長選擇烏拉爾甘草含多種黃酮類化合物，其黃酮母核所含的游離羥基在適當(dāng)?shù)慕橘|(zhì)條件下能與金屬鋁離子形成絡(luò)合物而顯色。用一定濃度的亞硝酸鈉溶液、硝酸鋁溶液、氫氧化鈉溶液顯色，于450-550nm處掃描，對(duì)照品和供試品溶液的吸收光譜均在510nm處有最大吸收，因此測(cè)定波長選擇510nm。3.1.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備稱取蘆丁對(duì)照品10mg，用30%的乙醇溶解，搖勻，定容至10ml，使之成為濃度為1.00mg/

6、ml的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品溶液，作為貯備液備用。第7頁量取上述溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6ml，分別加水至3ml，加5%亞硝酸鈉溶液0.5ml，放置6min，加10%的硝酸鋁溶液0.5m1，搖勻、放置6min后加5%的氫氧化鈉溶液2.5m1，混勻、放置15min后蒸餾水定容至10ml,放置15min。用紫外分光光度計(jì)在500nm處測(cè)吸光度，以對(duì)照品濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)做標(biāo)準(zhǔn)曲線。圖1蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)準(zhǔn)曲線3.1.5供試液總黃酮含量的測(cè)定分別量取待測(cè)液1ML置10ML的容量瓶，按標(biāo)準(zhǔn)曲線項(xiàng)下操作顯色，測(cè)定吸收度，利用吸光度及回歸方程計(jì)算各樣品總黃酮百分

7、含量（T）計(jì)算公式為：T=C(mg/ml)*N*V(ml)/W(mg)*100%N為樣品稀釋倍數(shù)；V為提取液定容體積；W為樣品質(zhì)量。3.2單因素試驗(yàn)與結(jié)果3.2.1乙醇濃度對(duì)提取率的影響準(zhǔn)確稱取粉碎樣2.0g（5份），置于250ML平底燒瓶，分別加入50%，60%，70%，80%，90%乙醇40ml,采用乙醇回流法提?。ㄌ崛囟葹?0℃，提取時(shí)間為2h，提取2次）。提取液抽濾，轉(zhuǎn)至50ml容量瓶，定容，測(cè)定，計(jì)算提取率。結(jié)果見圖2。第7頁圖2乙醇濃度對(duì)提取率的影響從圖2中可以看出，乙醇濃度為80%時(shí)，提取率達(dá)到最高。在試驗(yàn)中，隨著乙醇濃度（50%~90%）的增加