正交試驗(yàn)優(yōu)選蒙椴樹(shù)總黃酮的提取工藝

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1、2010年7月內(nèi)蒙古大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)JuI．20lO第41卷第4期JournalofInnerMongoliaUniversityVolJ41No．4文章編號(hào)：1O00—1638(2010)04—0381—03正交試驗(yàn)優(yōu)選蒙椴樹(shù)總黃酮的提取工藝?yán)钅?，田福利，王瑞?1．內(nèi)蒙古大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院，呼和浩特010021；2．大唐多倫煤化工有限責(zé)任公司，內(nèi)蒙古多倫027300)摘要：研究了蒙椴樹(shù)中總黃酮的最佳提取條件．采用(3)正交表設(shè)計(jì)方案進(jìn)行試驗(yàn)，以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)品，用紫外一可見(jiàn)分光光度法測(cè)定蒙椴樹(shù)乙醇提取物中的總黃酮含量．結(jié)果表明：乙醇濃度對(duì)蒙椴樹(shù)總黃

2、酮的提取影響較大，其他3個(gè)因素影響程度排序?yàn)椋禾崛r(shí)間>提取次數(shù)>乙醇用量．1o倍量95乙醇，提取次數(shù)2次，每次提取時(shí)間3小時(shí)為本次實(shí)驗(yàn)篩選出的最佳條件．關(guān)鍵詞：蒙椴樹(shù)；總黃酮；正交試驗(yàn)中圖分類(lèi)號(hào)：O621．4文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A蒙椴是椴樹(shù)科(Tiliaceae)椴樹(shù)屬(TiliaL．)植物，別名小葉椴，是內(nèi)蒙古地區(qū)典型樹(shù)種，椴樹(shù)的樹(shù)皮和根皮用于治療筋無(wú)力、慢性咳嗽、關(guān)節(jié)炎、風(fēng)濕等疾病，為民間常用藥材．歐美則應(yīng)用椴樹(shù)花作發(fā)汗劑、鎮(zhèn)靜劑、解熱劑等，多種椴樹(shù)的花和葉被藥典收錄用于治療感冒、發(fā)燒等．椴樹(shù)還有助于防止動(dòng)脈硬化，心肌梗塞等疾病，將椴樹(shù)蜜添加在酒中，可調(diào)

3、配成減輕疲勞，恢復(fù)體力的飲料．目前已開(kāi)展了其對(duì)心血管系統(tǒng)、抗炎、護(hù)肝和抗菌抗病毒等作用的研究．椴樹(shù)中的黃酮苷具有多種生物活性．它有維生素P樣作用，能降低血管脆性及異常的通透性，可用于防治高血壓及動(dòng)脈硬化的輔助治療劑．鑒于黃酮類(lèi)化合物具有的藥理活性，本文對(duì)其提取條件進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究．1實(shí)驗(yàn)部分1．1儀器uV一120—02型紫外一可見(jiàn)分光光度計(jì)(日本島津)，sHz—C型水循環(huán)式多用真空泵．1．2材料蒙椴樹(shù)皮和樹(shù)葉均采自內(nèi)蒙古林業(yè)科學(xué)研究院植物園，并由張玉鳳研究員鑒定樹(shù)種為T(mén)iliaMongolicaMaxim．其他試劑均為分析純．1．3實(shí)驗(yàn)方法1．3．1黃酮的

4、提取方法精密稱取冷凍的蒙椴樹(shù)皮5．0g，按照正交試驗(yàn)表選定的因素和水平用乙醇回流提取．1．3．2提取條件的選擇根據(jù)黃酮類(lèi)化合物易溶于乙醇、熱穩(wěn)定性強(qiáng)等特性，選擇乙醇為提取溶劑，以總黃酮含量為指標(biāo)，對(duì)乙醇濃度、用量、提取時(shí)間、提取次數(shù)等四個(gè)因素進(jìn)行考察，每個(gè)因素限定三個(gè)水平，根據(jù)正交表L(3)安排實(shí)驗(yàn)．具體內(nèi)容見(jiàn)表1．*收稿日期：2010—03—10：修回日期：2010—04—09基金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(20562006)；內(nèi)蒙古自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(200508010201)作者簡(jiǎn)介：李娜(1980一)，女(蒙古族)，內(nèi)蒙古赤峰市人，200

5、6級(jí)碩士研究生．通信作者：田福利(1958一)，男，內(nèi)蒙古集寧市人，教授，碩士．研究方向：有機(jī)天然產(chǎn)物．382內(nèi)蒙古大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)表1正交設(shè)計(jì)因素和水平Table1Factersandlevelsoforthogonaltest123456781l1222331．3．3標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精密稱取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品20．0mg置于200mL容量瓶中，加6O％乙醇，溶解至刻度，搖勻即得標(biāo)準(zhǔn)液，精密吸取標(biāo)準(zhǔn)品液0，0．1，0．2，0．3，0．4，0．5mL置于10．OraL容量瓶中，分別加5％亞硝酸鈉溶液0．3mL，搖勻放置6分鐘，加1O硝酸鋁溶液0．3mL搖勻

6、放置6分鐘，再加4氫氧化鈉溶液4mL，最后用3O的乙醇稀釋至刻度，搖勻放置15分鐘，以蒸餾水為空白對(duì)照，在510nm123l23l2處測(cè)定吸光度．以濃度(c)與吸光度(A)進(jìn)行線形回歸，得回歸方程為A一0．0125C一0．0008，r一O．99971．3．4蒙椴樹(shù)中總黃酮含量的測(cè)定精密稱取5．Og蒙椴樹(shù)皮共九份，置于圓底燒瓶中，按正交實(shí)驗(yàn)進(jìn)行加熱回流，將所得提取物用乙醚萃取，合并濾液，6O乙醇定容到250mL．分別從試液中吸取1．0mL于10mL的容量瓶中，按實(shí)驗(yàn)方法測(cè)得吸光度值，由回歸方程計(jì)算蒙椴樹(shù)皮中總黃酮的含量．123231312結(jié)果2．1最佳條

7、件的測(cè)定2．1．1直觀分析由表2中可以看出，乙醇濃度對(duì)總黃酮的含量影響較大，乙醇用量則相對(duì)較小，各因素的最優(yōu)組合確定為A。B。CD即為1O倍量95乙醇，提取次數(shù)為2次，每次提取時(shí)間為31小時(shí)2．3312Z32．1．2方差分析由表3方差分析數(shù)據(jù)可知乙醇濃度和提取時(shí)間對(duì)指標(biāo)均有顯著作用，乙醇用量無(wú)顯著差異，這與直觀分析結(jié)果基本一致．表2正交實(shí)驗(yàn)安排及結(jié)果Table2Arrangementsandresultsoforthogonaltest實(shí)驗(yàn)號(hào)乙醇濃度(A)提取時(shí)間(B)提取次數(shù)(C)乙醇用量(D)黃酮含量／4．816．265．156．737．437．4

8、44．606．448．622．2重復(fù)性試驗(yàn)取3份凍干的蒙椴樹(shù)皮各10克，按最佳提取條件平行操作