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《加味補(bǔ)肝湯對糖尿病大鼠坐骨神經(jīng)中蛋白激酶cβ亞型表達(dá)的影響論文》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、加味補(bǔ)肝湯對糖尿病大鼠坐骨神經(jīng)中蛋白激酶Cβ亞型表達(dá)的影響論文.freelRNA表達(dá)的影響,探討其對實(shí)驗(yàn)性糖尿病大鼠周圍神經(jīng)病變的防治作用。方法65只大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后,隨機(jī)取20只為正常組,45只造模,以鏈脲佐菌素誘發(fā)糖尿病模型,將造模成功后的40只大鼠隨機(jī)分為模型組、加味補(bǔ)肝湯組。分別于治療后4、8周處死大鼠,用反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)技術(shù)測定坐骨神經(jīng)中PKC-βⅡmRNA的表達(dá)。結(jié)果治療后4、8周模型組大鼠PKC-βⅡmRNA表達(dá)明顯高于正常對照組(P＜0.05),加味補(bǔ)肝湯組PKC-βⅡmRNA表達(dá)明顯低于同期模型組(P＜0.05)。結(jié)論加味補(bǔ)肝湯對實(shí)驗(yàn)性糖尿病大鼠周圍神
2、經(jīng)病變有一定的防治作用?！娟P(guān)鍵詞】加味補(bǔ)肝湯；糖尿??；坐骨神經(jīng)；蛋白激酶Cβ亞型；大鼠Abstract：ObjectiveToobservetheeffectofJiaentaldiabeticratandexploreitspreventiveandtherapeuticeffectsonperipheralneuropathyinexperimentaldiabeticrats.MethodsIn65ratsinvolved,45ratsadeasmodeland20odelodelratslydividedintomodelgroupandJiathebeginningoftreatme
3、ntrespectively,andPKC-βⅡmRNAofsciaticnerveerasechainreaction(RT-PCR).ResultsPKC-βⅡexpressionofthemodelgroupon4thor8thalcontrolgroup(P＜0.05),.freelarkedlyloodelgroup(P＜0.05).ConclusionJiaentaldiabeticrats.KeyL,浸泡30min,水煎40min,第2次煎時(shí)加水200mL,煎煮20min,取煎汁,混勻,水浴濃縮成每1mL含2.72g原藥材的藥液。1.3儀器TC-512型PCR儀(英國TECHNE
4、公司)；血糖儀(德國羅氏公司ACCU-CHEK)；Motic2000圖像分析儀；MS302多媒體生物信號記錄分析系統(tǒng)(廣州中醫(yī)藥大學(xué))。1.4試劑瓊脂糖(北京鼎國公司)；溴化乙錠、鏈脲佐菌素(美國Sigma公司)；Trizol(MRC公司)；反轉(zhuǎn)錄(RT)試劑盒(美國MRI公司)；PreMixTaq(寶生物大連有限公司)；引物由上海生工生物技術(shù)有限公司合成；其他常規(guī)試劑由湘雅醫(yī)院藥劑科提供。2實(shí)驗(yàn)方法2.1分組65只大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后,隨機(jī)取20只為正常組,45只造模,將造模成功后的40只大鼠隨機(jī)分為模型組20只,加味補(bǔ)肝湯實(shí)驗(yàn)組20只。2組血糖值比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。2.2
5、造模及給藥參照文獻(xiàn)3方法。造模前禁食12h,一次性腹腔注射1%鏈脲佐菌素(50mg/kg,0.1mol/L檸檬酸鈉-檸檬酸緩沖液配制而成,pH4.2～4.5)誘發(fā)糖尿病,72h后用血糖儀測定尾尖血血糖,凡血糖＞16.7mmol/L為造模成功,造模不成功的大鼠按上述方法重復(fù)1次。正常組20只大鼠禁食12h后一次性腹腔注射相等容積0.1mol/L的檸檬酸鈉-檸檬酸緩沖液。2.3血糖測定尾靜脈取血,采用葡萄糖氧化酶法,羅氏公司ACCU-CHEK血糖儀及試紙條測定。2.4神經(jīng)電生理檢測參照文獻(xiàn)4方法并略加改進(jìn),分別于治療后4、8周末進(jìn)行神經(jīng)電生理檢測。大鼠一次性腹腔注射10%水合氯醛(350mg/kg
6、),麻醉后俯臥固定,刺激電極置于坐骨切跡(刺激強(qiáng)度2.0mV,刺激波寬3.0ms),在踝部(遠(yuǎn)端)和右足二趾間分別插入記錄電極,參考電極置于記錄電極和刺激電極之間,并連接計(jì)算機(jī)MS302多媒體生物信號記錄分析系統(tǒng),記錄遠(yuǎn)近端坐骨神經(jīng)產(chǎn)生動(dòng)作電位的潛伏期,測定兩記錄電極間的距離,神經(jīng)傳導(dǎo)速度為記錄電極之間的距離/動(dòng)作電位潛伏期之差。測定時(shí)保持被檢測肢體溫度在37℃左右。2.5標(biāo)本收集分別于治療后4、8周一次性腹腔注射10%水合氯醛(350mg/kg)麻醉,俯臥位固定,取左側(cè)梨狀肌下緣坐骨神經(jīng)約1cm,置于液氮中,-80℃保存,用于mRNA檢測。2.6反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)①引物合成：用Primer
7、Premier5.0軟件設(shè)計(jì)引物,由上海生工生物技術(shù)有限公司合成(見表1)。表1目的基因擴(kuò)增引物序列（略）②組織總RNA提取：采用Trizol提取總RNA。按Trizol試劑說明書提取總RNA,溶解于20μLDEPC處理滅菌雙蒸水,經(jīng)2%瓊脂糖凝膠電泳檢測RNA的完整性,并測定A260/A280比值在1.8～2.0之間,說明RNA樣品純度理想；于-70℃凍存。③反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)
