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《土壤中脫氫酶活性的測(cè)定-ttc分光光度法》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫(kù)。
1、土壤中脫氫酶活性的測(cè)定殷曉晨，武亨杰，朱承彬（中國(guó)石油大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院，山東青島266555）摘要：為了研究土壤中微生物降解有機(jī)物的能力，設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)，采用TTC分光光度法測(cè)定受石油污染并接受生物修復(fù)的各土壤樣品中脫氫酶的活性。研究表明，所采集的土壤樣品中脫氫酶的含量很少，基本無(wú)法用本方法檢測(cè)出，說(shuō)明土壤在過(guò)去的一年里發(fā)生了某些變化使脫氫酶含量降低。關(guān)鍵詞：土壤；脫氫酶；TTC；紫外分光光度法中圖分類號(hào)：X705文獻(xiàn)標(biāo)志碼：AMeasurementofCatalaseActivityinSoilYinXiao-chen,WuH
2、eng-jie,ZhuCheng-bin（CollegeofChemistryandChemicalEngineering,ChinaUniversityofPetroleum，Qingdao266555，China）Abstract:Thisexperimentisdesignedtoinvestigatetheabilityofmicroorganismsinsoiltodegradeorganicmatters.Thedehydrogenaseactivityinsoilwhichwascontaminatedbyp
3、etroleumandthenbiologicallyrepairedwasmeasuredbythemethodofultravioletspectrometry.Theresearchshowsthatthecontentofdehydrogenaseinsoilssamplesaresominutethatcannotbedetectedbythismethod.Keywords:soil;dehydrogenase;TTC;ultravioletspectrometry.土壤中的微生物對(duì)于有機(jī)物的降解，實(shí)質(zhì)上是微生
4、物經(jīng)過(guò)一系列的酶的催化作用下的生物氧化還原反應(yīng)。參加生物氧化的重要酶為氧化酶和脫氫酶二大類，其中脫氫酶類尤為重要。其中脫氫酶能使氧化有機(jī)物的氫原子活化并傳遞給特定的受氫體實(shí)現(xiàn)有機(jī)物的氧化和轉(zhuǎn)化。如果脫氫酶活化的氫原子被人為受氫體接受，就可以通過(guò)直接測(cè)定人為受氫體濃度的變化間接測(cè)定脫氫酶的活性，表征生物降解過(guò)程中微生物的活性。因此，脫氫酶的活性可以反映土壤體系內(nèi)活性微生物量以及其對(duì)有機(jī)物的降解活性，以評(píng)價(jià)降解性能。脫氫酶活性測(cè)定方法有MB.2H定性分析法和TTC比色法，目前用得較多的為氯化三苯基四氮唑（TTC）比色法。利用T
5、TC作為人為受氫體，無(wú)色的TTC受氫后變成紅色的TPF（三苯基甲月替），根據(jù)紅色的深淺，測(cè)出相應(yīng)的吸光度值，從而計(jì)算TPF的生成量，求出脫氫酶的活性。本實(shí)驗(yàn)使用TTC分光光度法測(cè)定土壤中脫氫酶的活性。1.實(shí)驗(yàn)1.1實(shí)驗(yàn)器材本實(shí)驗(yàn)所用器材為721分光光度計(jì)，比色皿，三角瓶，容量瓶，漏斗，濾紙等。1.2試劑1mg/mLTTC溶液（繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線）：稱取0.5gTTC，溶解，定容至500mL；1%TTC溶液（土壤測(cè)定）：取1gTTC，溶解，并定容至100mL容量瓶中；Tris-HCl緩沖溶液（pH=7.6）：稱取6.037gTri
6、s（三強(qiáng)甲基氨基甲烷，分析純），再加入1mol/L的鹽酸，調(diào)pH值為7.6；1.3土壤樣品本實(shí)驗(yàn)土壤樣品取自于受石油污染并接受生物修復(fù)的位于東營(yíng)市的土壤，共有14個(gè)土壤樣品。1.4實(shí)驗(yàn)方法1.4.1TPF標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制配制系列濃度的TTC標(biāo)準(zhǔn)溶液：取8個(gè)50mL容量瓶，分別吸取0.5mL、1mL、1.5mL、2mL、2.5mL、3mL、3.5mL1mg/mLTTC溶液加入以上容量瓶中，用蒸餾水定容。繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：取8支具塞試管，分別依次加入2mLTris-HCl緩沖溶液（pH=7.6）、2mL蒸餾水和2mL不同濃度的TTC
7、標(biāo)準(zhǔn)溶液（空白對(duì)照用蒸餾水代替TTC溶液）。然后分別加入0.1g低亞硫酸鈉（保險(xiǎn)粉），振蕩搖勻。待充分顯色后，加入5mL甲苯，振蕩萃取微紅色的TPF，上清液于485nm處測(cè)定吸光度值。以TPF的濃度為橫坐標(biāo)，以吸光度A值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。1.4.2土樣測(cè)定分別取5g過(guò)1.25mm篩的新鮮土壤樣品于具塞三角瓶中，每個(gè)三角瓶加入2mL1%的TTC溶液，2mL蒸餾水，充分混勻。置于37℃恒溫箱中避光培養(yǎng)6h。培養(yǎng)結(jié)束后，加入5mL甲醇，劇烈震蕩1min，后靜置5min，再振蕩20s，然后靜置5min。將三角瓶中的物質(zhì)全部過(guò)濾
8、到比色管中，并用少量的甲醇洗滌三角瓶2-3次，洗滌液也全部過(guò)濾到比色管中，定容到25mL，于485nm下測(cè)定吸光度值A(chǔ)，以每g干土生成的TPF為脫氫酶的一個(gè)活性單位。1.結(jié)果分析表1標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制數(shù)據(jù)表C(TTC)/(ug/ml)空白10203040506070C(TPF)/(ug/ml)03.597.1
