實(shí)驗(yàn)四 液相色譜法測(cè)定苯甲酸、山梨酸含量

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1、周次日期課時(shí)安排3課時(shí)課題實(shí)驗(yàn)三液相色譜法測(cè)定苯甲酸、山梨酸含量重點(diǎn)難點(diǎn)教學(xué)目標(biāo)1、了解高效液相色譜儀的結(jié)構(gòu)和工作原理；2、理解苯甲酸和山梨酸的高效液相色譜方法。教學(xué)方法教學(xué)手段1．要求學(xué)生實(shí)驗(yàn)前認(rèn)真預(yù)習(xí)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容，實(shí)驗(yàn)前教師檢查并批改預(yù)習(xí)報(bào)告，了解學(xué)生預(yù)習(xí)情況。2．實(shí)驗(yàn)前先進(jìn)行重點(diǎn)的講解和示范基本操作、實(shí)驗(yàn)步驟中的注意事項(xiàng)，實(shí)驗(yàn)過程中巡回指導(dǎo)。教學(xué)過程實(shí)驗(yàn)操作參考GB/T5009.29-2003食品中山梨酸、苯甲酸的測(cè)定第二法?高效液相色譜法一、原理??試樣加溫除去二氧化碳和乙醇，調(diào)pH至近中性，過濾后進(jìn)高效液相色譜儀，經(jīng)反相色譜分離后，根

2、據(jù)保留時(shí)間和峰面積進(jìn)行定性和定量。二、試劑??方法中所用試劑，除另有規(guī)則外，均為分析純?cè)噭?，水為蒸餾水或同等純度水，溶液為水溶液。甲醇：經(jīng)濾膜（0.5μm）過濾。稀氨水（1+1）：氨水加水等體積混合。乙酸銨溶液（0.02mol/L）：稱取<1.54g>乙酸銨，加水至1000mL，溶解，經(jīng)0.45μm濾膜過濾。碳酸氫鈉溶液（<20g>/L）：稱取<2g>碳酸氫鈉（優(yōu)級(jí)純），加水至100mL，振搖溶解。苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液：準(zhǔn)確稱取<0.1000g>苯甲酸，加碳酸氫鈉溶液（<20g>/L）5mL，加熱溶解，移入100mL容量瓶中，加水定容至100

3、mL，苯甲酸含量為1mg/mL，作為儲(chǔ)備溶液。3教學(xué)過程山梨酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液：準(zhǔn)確稱取<0.1000g>山梨酸，加碳酸氫鈉溶液（<20g>/L）5mL，加熱溶解，移入100mL容量瓶中，加水定容至100mL，山梨酸含量為1mg/mL，作為儲(chǔ)備溶液。苯甲酸、山梨酸標(biāo)準(zhǔn)混合使用溶液：分別取苯甲酸、山梨酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液1、2.5、5、10、15mL，放入100mL容量瓶中，加水至刻度，經(jīng)0.45μm濾膜過濾。三、儀器高效液相色譜儀（帶紫外檢測(cè)器）四、分析步驟試樣處理<>汽水：稱取<5.00g>~<10.0g>試樣，放入小燒杯中，微溫?cái)嚢璩ザ趸迹?/p>

4、用氨水（1+1）調(diào)pH約7。加水定容至10mL~20mL，經(jīng)濾膜（HA0.45μm）過濾。<>果汁類：稱取<5.00g>~<10.0g>試樣，用氨水（1+1）調(diào)pH約7，加水定容至適當(dāng)體積，離心沉淀，上清液經(jīng)0.45μm濾膜過濾。<>配制酒類：稱取<10.0g>試樣，放入小燒杯中，水浴加熱除去乙醇，用氨水（1+1）調(diào)pH約7，加水定容至適當(dāng)體積，經(jīng)0.45μm濾膜過濾。高效液相色譜參考條件<>柱：YWG-C18<4.6mm>×<250mm>，10μm不銹鋼柱。<>流動(dòng)相：甲醇：乙酸銨溶液（0.02mol/L）（5:95）。<>流速：1mL/

5、min。<>進(jìn)樣量：10μL。<>檢測(cè)器：紫外檢測(cè)器，230nm波長(zhǎng)。?根據(jù)保留時(shí)間定性，外標(biāo)峰面積法定量。課后作業(yè)教學(xué)后記2分鐘出現(xiàn)的可能是溶劑峰脫機(jī)文件調(diào)用實(shí)驗(yàn)結(jié)果3推一針濃度峰面積提取10ml雪碧（只含苯甲酸）稀釋至50ml稀釋五倍六個(gè)芒果（只含山梨酸）4,5組雪碧樣品4,5組芒果樣品時(shí)間樣品＼序號(hào)12345雪碧芒果6.5min7min苯甲酸739180335237347109882257＼183610min山梨酸84021084144847712650＼5736雜質(zhì)123453樣品＼序號(hào)濃度＼ug/ml102550100150峰面積

6、7391803352373471098884021084144847712650數(shù)據(jù)處理：雪碧檢測(cè)樣品中苯甲酸含量y=2257代入標(biāo)準(zhǔn)曲線y=73.548x-47.704得x=31.33ug/ml由于檢測(cè)樣品為稀釋了五倍的雪碧，所以c1=5*31.33=156.5ug/ml芒果飲料檢測(cè)樣品中山梨酸含量y=5736代入標(biāo)準(zhǔn)曲線y=84.55x-21.065得x=68.10ug/ml由于檢測(cè)樣品為稀釋了五倍的原飲料，所以c3=340.5ug/ml由GB中飲料的山梨酸含量不得超過200ug/ml，碳酸飲料中苯甲酸含量不得超過500ug/ml，可知

7、測(cè)得樣品符合國家標(biāo)準(zhǔn)。芒果飲料的速溶圖中5min處出現(xiàn)峰，并非苯甲酸。因?yàn)楸考姿岬姆宄霈F(xiàn)時(shí)間為6.293min,查配料表及其他數(shù)據(jù)可推出其為乙酰胺酸鉀。3