液相色譜測(cè)定苯甲酸和山梨酸鉀的含量.docx

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1、液相色譜法測(cè)定苯甲酸和山梨酸鉀的含量一、儀器液相色譜儀一臺(tái)（配C18-BP反相色譜柱，紫外檢測(cè)器，六通閥，化學(xué)工作站），超聲波清洗器，流動(dòng)相過濾裝置二、試劑分析純：甲醇，醋酸銨，高純水，苯甲酸，山梨酸，NaHCO3三、準(zhǔn)備工作1、1mg/ml苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)貯備液準(zhǔn)確稱取0.100g苯甲酸，用水適量，加5mlNaHCO3溶液，定容至100ml備用2、1mg/ml山梨酸貯備液準(zhǔn)確稱取0.100g山梨酸，用水適量，加5mlNaHCO3溶液，定容至100ml備用3、苯甲酸山梨酸混合標(biāo)準(zhǔn)液利用苯甲酸和山梨酸標(biāo)準(zhǔn)貯備液配置不少于2個(gè)不同濃度標(biāo)準(zhǔn)混合液10ml，取少量過濾后貯存于樣品瓶中

2、備用如：混合標(biāo)樣1#2#3#試樣苯甲酸mg/ml0.10.3練習(xí)混合樣山梨酸mg/m0.10.354、流動(dòng)相稱取02g醋酸銨固體，用純水溶解稀釋到1000ml配成2g/L醋酸銨溶液，與甲醇混合成（體積比NH4Ac:CH3OH=95:5）流動(dòng)相，經(jīng)0.45um濾膜過濾，裝于流動(dòng)相貯液瓶中，用超聲波脫氣20min備用。三、實(shí)驗(yàn)條件和方法進(jìn)樣量：10uL；流動(dòng)相流量：1mL/min；檢測(cè)器波長：230nm定性方法：保留時(shí)間定性；定量方法：外標(biāo)峰面積定量。四、實(shí)驗(yàn)步驟1.打開液相色譜儀開關(guān)和檢測(cè)器開關(guān)，儀器自檢。2.打開液相色譜儀沖洗閥，銨沖洗鍵，沖洗約5~10毫升溶液直至流動(dòng)

3、相管路無氣泡，再次按沖洗鍵，關(guān)閉沖洗，并關(guān)閉沖洗閥3.按色譜儀“運(yùn)作/停止”鍵，啟動(dòng)高壓泵系統(tǒng)。4.打開工作站軟件5.儀器控制→系統(tǒng)配置→驗(yàn)證系統(tǒng)配置→確定。6.儀器控制→流量1ml/min最大壓力25Mpa檢測(cè)器→波長230nm→確定。7.啟動(dòng)基線監(jiān)測(cè)→基線平穩(wěn)后→停止基線監(jiān)測(cè)。8.啟動(dòng)數(shù)據(jù)菜單→屏幕出現(xiàn)綠色小瓶子→進(jìn)樣“LOAD”位置轉(zhuǎn)到“INJECT”位置9.先進(jìn)0.1的標(biāo)樣再進(jìn)0.3/0.35的標(biāo)樣再進(jìn)試樣→保存數(shù)據(jù)。10.定量→用標(biāo)樣計(jì)算→右擊中間空白位置→打開標(biāo)準(zhǔn)樣品→選擇樣1→添加→選標(biāo)樣2→添加→打開右擊中間空白位置→設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)樣品→點(diǎn)第一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)樣→雙擊組

4、分名→輸入“組分名”和濃度→確定；點(diǎn)第二個(gè)標(biāo)準(zhǔn)樣→雙擊組分名→輸入“組分名”和濃度→確定。11.雙擊中間空白位置→計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)曲線。12.文件另存為→儲(chǔ)存方法。13.打開試樣→打開方法→積分→組分表。如果不出現(xiàn)分析結(jié)果，右擊組分表→使用時(shí)間窗→計(jì)算濃度。14.運(yùn)行結(jié)束“運(yùn)行/停止”按鍵（在進(jìn)行數(shù)據(jù)處理時(shí)可以關(guān)閉色譜儀的高壓泵）一、注意事項(xiàng)1.溶劑和試樣一定要用0.45um膜過濾2.溶劑中的氣泡對(duì)保留時(shí)間重復(fù)性影響較大，并且會(huì)造成基線噪音。3.外標(biāo)法中進(jìn)樣量的不用影響結(jié)果的準(zhǔn)確性。