液相色譜測定苯甲酸和山梨酸鉀的含量.docx

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1、液相色譜法測定苯甲酸和山梨酸鉀的含量一、儀器液相色譜儀一臺（配C18-BP反相色譜柱，紫外檢測器，六通閥，化學(xué)工作站），超聲波清洗器，流動相過濾裝置二、試劑分析純：甲醇，醋酸銨，高純水，苯甲酸，山梨酸，NaHCO3三、準(zhǔn)備工作1、1mg/ml苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)貯備液準(zhǔn)確稱取0.100g苯甲酸，用水適量，加5mlNaHCO3溶液，定容至100ml備用2、1mg/ml山梨酸貯備液準(zhǔn)確稱取0.100g山梨酸，用水適量，加5mlNaHCO3溶液，定容至100ml備用3、苯甲酸山梨酸混合標(biāo)準(zhǔn)液利用苯甲酸和山梨酸標(biāo)準(zhǔn)貯備液配置不少于2個不同濃度標(biāo)準(zhǔn)混合液10ml，取少量過濾后貯存于樣品瓶中

2、備用如：混合標(biāo)樣1#2#3#試樣苯甲酸mg/ml0.10.3練習(xí)混合樣山梨酸mg/m0.10.354、流動相稱取02g醋酸銨固體，用純水溶解稀釋到1000ml配成2g/L醋酸銨溶液，與甲醇混合成（體積比NH4Ac:CH3OH=95:5）流動相，經(jīng)0.45um濾膜過濾，裝于流動相貯液瓶中，用超聲波脫氣20min備用。三、實驗條件和方法進樣量：10uL；流動相流量：1mL/min；檢測器波長：230nm定性方法：保留時間定性；定量方法：外標(biāo)峰面積定量。四、實驗步驟1.打開液相色譜儀開關(guān)和檢測器開關(guān)，儀器自檢。2.打開液相色譜儀沖洗閥，銨沖洗鍵，沖洗約5~10毫升溶液直至流動

3、相管路無氣泡，再次按沖洗鍵，關(guān)閉沖洗，并關(guān)閉沖洗閥3.按色譜儀“運作/停止”鍵，啟動高壓泵系統(tǒng)。4.打開工作站軟件5.儀器控制→系統(tǒng)配置→驗證系統(tǒng)配置→確定。6.儀器控制→流量1ml/min最大壓力25Mpa檢測器→波長230nm→確定。7.啟動基線監(jiān)測→基線平穩(wěn)后→停止基線監(jiān)測。8.啟動數(shù)據(jù)菜單→屏幕出現(xiàn)綠色小瓶子→進樣“LOAD”位置轉(zhuǎn)到“INJECT”位置9.先進0.1的標(biāo)樣再進0.3/0.35的標(biāo)樣再進試樣→保存數(shù)據(jù)。10.定量→用標(biāo)樣計算→右擊中間空白位置→打開標(biāo)準(zhǔn)樣品→選擇樣1→添加→選標(biāo)樣2→添加→打開右擊中間空白位置→設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)樣品→點第一個標(biāo)準(zhǔn)樣→雙擊組

4、分名→輸入“組分名”和濃度→確定；點第二個標(biāo)準(zhǔn)樣→雙擊組分名→輸入“組分名”和濃度→確定。11.雙擊中間空白位置→計算標(biāo)準(zhǔn)曲線。12.文件另存為→儲存方法。13.打開試樣→打開方法→積分→組分表。如果不出現(xiàn)分析結(jié)果，右擊組分表→使用時間窗→計算濃度。14.運行結(jié)束“運行/停止”按鍵（在進行數(shù)據(jù)處理時可以關(guān)閉色譜儀的高壓泵）一、注意事項1.溶劑和試樣一定要用0.45um膜過濾2.溶劑中的氣泡對保留時間重復(fù)性影響較大，并且會造成基線噪音。3.外標(biāo)法中進樣量的不用影響結(jié)果的準(zhǔn)確性。