HPLC法同時測定風(fēng)寒感冒片中葛根素和橙皮苷的含量.doc

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1、HPLC法同時測定風(fēng)寒感冒片中葛根素和橙皮苷的含量【摘要】目的建立風(fēng)寒感冒片的含量測定方法。方法采用HPLC法，色譜柱為DiamondC18（4.6mm×250mm，5μm），流動相為甲醇水（體積比25∶75），檢測波長：葛根素250nm，橙皮苷283nm。結(jié)果葛根素在進(jìn)樣量為0.156～3.152μg范圍內(nèi)，橙皮苷在進(jìn)樣量為0.100～2.006μg范圍內(nèi)，與峰面積呈良好的線性關(guān)系；平均加樣回收率：葛根素為99.0%，RSD=0.97%，橙皮苷為98.4％，RSD=1.27％（n=9）。結(jié)論

2、該法操作簡便易行、準(zhǔn)確可靠，可用于風(fēng)寒感冒片的質(zhì)量控制?！娟P(guān)鍵詞】風(fēng)寒感冒片葛根素橙皮苷高效液相色譜法風(fēng)寒感冒片是由麻黃、葛根、紫蘇葉、防風(fēng)、陳皮、白芷等十一味中藥經(jīng)提取加工而成的片劑，具有解表發(fā)汗、疏風(fēng)散寒的作用，臨床用于感冒身熱、頭痛、咳嗽、鼻塞、流涕。本文采用HPLC法同時測定本品所含葛根素、橙皮苷的含量，以此作為風(fēng)寒感冒片的質(zhì)量控制指標(biāo)。　　1儀器、試劑與樣品　　Waters2695高效液相色譜儀，Waters2487紫外檢測器（美國Waters公司）;MilliPORE純水器（美國密

3、里博公司）。葛根素對照品、橙皮苷對照品（中國藥品生物制品檢定所，供含量測定用）；甲醇為色譜純；水為高純水；其他試劑均為分析純；風(fēng)寒感冒片樣品（規(guī)格：每片重0.6g）及缺葛根、陳皮的陰性對照樣品由廣西輝越制藥有限公司提供?！　?方法與結(jié)果　　2.1色譜條件DiamondC18色譜柱(5μm，4.6mm×250mm)；流動相為甲醇水（體積比25∶75）；檢測波長葛根素為250nm，橙皮苷為283nm；柱溫：35℃；進(jìn)樣量：10μL。理論板數(shù)按葛根素峰計算應(yīng)不低于2000。色譜圖見圖1?！　?.2供

4、試品溶液的制備取本品10片，除去包衣，研細(xì)，取0.4g，精密稱定，置錐形瓶中，精密加入體積分?jǐn)?shù)30％乙醇100mL，稱定重量，加熱回流1h，放冷，再稱定重量，用體積分?jǐn)?shù)30％乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液?！　?.葛根素；2.橙皮苷　　圖1對照品（A）、供試品（B）和陰性對照品的色譜圖（略）3　　Figure1HPLCchromatogramsofstandard（A）,sample（B）andblanksample（C）　　2.3線性關(guān)系考察精密稱取葛根素對照品19.7

5、0mg、橙皮苷對照品12.54mg，置25mL量瓶中，加體積分?jǐn)?shù)30％乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，得對照品貯備液。精密吸取上述對照品貯備液0.5、1、2、3、5、10mL，分別置25mL量瓶中，加體積分?jǐn)?shù)30％乙醇稀釋至刻度，搖勻，進(jìn)樣10μL測定。以對照品進(jìn)樣量為縱坐標(biāo)，峰面積為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果葛根素進(jìn)樣量在0.158～3.152μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，其回歸方程為:Y=2.159×105X+1.164×105（r=0.9998）；橙皮苷進(jìn)樣量在0.100～2.006μg范圍內(nèi)呈良

6、好的線性關(guān)系，其回歸方程為:Y=1.153×105X+1.435×105（r=0.9999）?！　?.4精密度試驗取供試品溶液（批號050701），連續(xù)進(jìn)樣5次，測定色譜峰面積，結(jié)果葛根素RSD為0.5％，橙皮苷RSD為0.7％，表明儀器精密度良好?！　?.5穩(wěn)定性試驗對同一供試品溶液（批號050701），12h內(nèi)每隔2h測定1次，結(jié)果葛根素的RSD為0.8%，橙皮苷的RSD為0.9％，表明供試品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定性良好?！　?.6重復(fù)性試驗取供試品（批號050701）6份，按“2.2”項下方法

7、制成供試品溶液，進(jìn)樣測定。結(jié)果6份樣品中葛根素平均含量為5.34mg/片，RSD為0.8％；橙皮苷平均含量為0.32mg/片，RSD為1.0％。表明重復(fù)性良好?！　?.7加樣回收率試驗取本品（批號050701，葛根素含量5.34mg/片、橙皮苷含量0.32mg/片）0.2g，共9份，精密稱定，分別精密加入對照品溶液（精密稱取橙皮苷對照品10.12mg，置10mL量瓶中，加體積分?jǐn)?shù)30％乙醇使溶解并稀釋至刻度，即得含橙皮苷1.012mg·mL-1的對照品溶液，備用；另精密稱取葛根素對照品33.68

8、mg，置500mL量瓶中，精密加入上述橙皮苷對照品溶液2mL，加體積分?jǐn)?shù)30％甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得含葛根素0.06736mg·mL-1、橙皮苷0.004048mg·mL-1的溶液）20、25、30mL，按“2.2”項下方法制備并測定含量，計算回收率，結(jié)果見表1、表2?！　?.8樣品測定取3批樣品按照“2.2”項下方法制成供試品溶液，進(jìn)樣測定，用峰面積按外標(biāo)法計算含量，結(jié)果見表3?！　?討論　　3.1取本品供試液適當(dāng)稀釋后，于紫外分光光度計上在200～400nm范圍內(nèi)掃描，其最大吸收波長為2