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《ifn-γ上調(diào)的單核細(xì)胞表面mhc-i類鏈相關(guān)分子促進(jìn)nk細(xì)胞活化》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、IFN-γ上調(diào)的單核細(xì)胞表面MHC-I類鏈相關(guān)分子促進(jìn)NK細(xì)胞活化作者：王惠明,王沂芹,阮志華,傅曉嵐,徐文岳,趙婷婷,吳玉章【摘要】 目的:研究IFN-γ誘導(dǎo)上調(diào)表達(dá)的單核細(xì)胞MHC-I類鏈相關(guān)分子(MICs)分子對NK細(xì)胞的活化作用。方法:采用密度梯離離心法分離人外周血單個核細(xì)胞（PBMC）,以免疫磁珠法從PBMC中特異性分選單核細(xì)胞及NK細(xì)胞,以細(xì)胞因子IFN-γ、TNF-α刺激單核細(xì)胞后,再將單核細(xì)胞與NK細(xì)胞共培養(yǎng),以流式細(xì)胞術(shù)（FCM）檢測NK細(xì)胞表面CD69分子及胞內(nèi)IFN-γ表達(dá),以51Cr釋放試驗檢測NK細(xì)胞對K562細(xì)胞的殺傷效應(yīng)。
2、結(jié)果:IFN-γ上調(diào)人單核細(xì)胞表面MICs表達(dá);IFN-γ刺激的單核細(xì)胞能促進(jìn)異體NK細(xì)胞CD69及胞內(nèi)IFN-γ表達(dá),能增強(qiáng)NK細(xì)胞對K562細(xì)胞的殺傷效應(yīng);單核細(xì)胞的這種效應(yīng)至少部分依賴于IFN-γ上調(diào)的MICs分子,因為用抗MIC抗體封閉或用細(xì)胞小室阻斷細(xì)胞接觸,可以明顯地抑制NK細(xì)胞的活化。結(jié)論:IFN-γ上調(diào)人單核細(xì)胞表面MICs分子介導(dǎo)了NK細(xì)胞的活化?！娟P(guān)鍵詞】單核細(xì)胞IFN-γMHC-I類相關(guān)分子NK細(xì)胞 活化的淋巴細(xì)胞（含NK、T、NKT細(xì)胞）分泌的細(xì)胞因子γ干擾素（IFN-γ）不僅具有直接的抗病毒作用,12更具有強(qiáng)大的免疫調(diào)節(jié)和修飾
3、功能。目前認(rèn)為,IFN-γ能廣泛地作用于體內(nèi)包括淋巴細(xì)胞在內(nèi)的多種細(xì)胞。對于單核細(xì)胞,IFN-γ一方面可以影響其向DC或巨噬細(xì)胞分化;另一方面,IFN-γ還能誘導(dǎo)單核細(xì)胞產(chǎn)生系列細(xì)胞因子［1,2］。機(jī)體單核細(xì)胞正常情況下處于免疫靜息狀態(tài),但在適宜的條件下,它可以通過轉(zhuǎn)化為DC或者分泌大量細(xì)胞因子來參與或調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答。最近研究發(fā)現(xiàn),單核細(xì)胞與NK細(xì)胞或T細(xì)胞之間存在著對話機(jī)制,并且IFN-γ及細(xì)胞間的直接接觸是介導(dǎo)單核細(xì)胞與淋巴細(xì)胞相互作用的關(guān)鍵因素［3］。NKG2D是同時表達(dá)于人類NK細(xì)胞及CD8+T細(xì)胞表面的活化受體。對于NK細(xì)胞,它直接啟動活化信號;
4、對于CD8+T細(xì)胞,它提供重要的共刺激信號［4］。MHC-I類鏈相關(guān)分子(MIC)是最早發(fā)現(xiàn)并且研究最多的NKG2D受體的配體。MIC是一種應(yīng)激誘導(dǎo)表達(dá)的分子,當(dāng)細(xì)胞處于熱休克、氧化、感染等狀態(tài)時,MIC分子即被誘導(dǎo)表達(dá)于細(xì)胞表面。細(xì)胞表面的MICs作為一種應(yīng)激“標(biāo)記”分子,能夠被NK細(xì)胞或CD8+T細(xì)胞表面的NKG2D受體識別,并刺激或共刺激NK細(xì)胞或CD8+T細(xì)胞活化,最終清除異常細(xì)胞。研究發(fā)現(xiàn),MICs分子低水平的表達(dá)于某些正常組織細(xì)胞如腸上皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞表面,單核細(xì)胞表面未見MICs表達(dá)［5］。NKG2D還在NK細(xì)胞、T細(xì)胞、DC及
5、其他組織細(xì)胞中起著重要的“橋梁”作用［6］。但NKG2D是否也在單核細(xì)胞與NK細(xì)胞對話中發(fā)揮作用？IFN-γ作用的單核細(xì)胞是否通過MIC-NKG2D促進(jìn)NK細(xì)胞活化？我們對此進(jìn)行了探討。 1材料和方法12 1.1材料FITC標(biāo)記抗人CD3（OKT3）、CD14（61D3）、CD69（FN50）、IFN-γ（4S.B3）單克隆抗體（mAb）、純化及生物素化抗人NKG2D(1D11)mAb、PE標(biāo)記抗人CD56mAb(NCAM)、抗體的各同型對照抗體均購于eBioscience公司;小鼠抗人MICsmAb(clone159207)購于R&D公司;
6、FITC標(biāo)記的山羊抗小鼠IgG及山羊抗兔IgG二抗購自北京中山生物技術(shù)有限公司。小鼠抗人CD14免疫磁珠（CD14MagneticParticles,CloneMфP9）、磁性細(xì)胞分離架購于BDBiosciencePharmingen公司;人重組干擾素-γ（IFN-γ）、重組干擾素-α（IFN-α）購自PeProtech公司;人淋巴細(xì)胞分離液（Ficoll-Hypaque）購自天津TDB生物技術(shù)發(fā)展中心;胎牛血清購自HyClone公司;FACSCalibur流式細(xì)胞儀購于BD公司?！ ?.2方法 1.2.1人PBMCs的分離及單核細(xì)胞、NK細(xì)胞的分選健
7、康志愿者外周血用生理鹽水作等倍稀釋后,按標(biāo)準(zhǔn)密度梯度離心法分離PBMCs。單核細(xì)胞及NK細(xì)胞采取陰性分選和陽性分選相結(jié)合的序貫分離法,按說明書操作進(jìn)行。先從PBMCs中分選CD14+細(xì)胞,再從其CD14-組分中去除CD3+細(xì)胞,最后從CD3-CD14-組分中分選CD56+細(xì)胞,即為CD3-CD56+NK細(xì)胞。取少量細(xì)胞分別行CD14、CD3/CD56流式細(xì)胞術(shù)（FCM）檢測,12確定CD14+及CD3+CD56-細(xì)胞的純度（>90%）。 1.2.2細(xì)胞株培養(yǎng)人紅白血病細(xì)胞K562由本研究所保存,培養(yǎng)于含100mL/LFCS的RPMI1640完全培
8、養(yǎng)液中?！ ?.2.3單核細(xì)胞/NK細(xì)胞共培養(yǎng)純化的單核細(xì)胞按2.5×108個/
