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1、Survivin基因干擾RNA對骨肉瘤MG作者：李鯤，楊述華，劉紅云，吳強，傅德皓【關鍵詞】骨肉瘤摘要：［目的］觀察Survivin基因siRNA表達載體對骨肉瘤細胞增殖和凋亡的影響。［方法］體外構建SurvivinshRNA表達載體pSilence21neoSurvivin，轉染骨肉瘤細胞系MG63，篩選穩(wěn)定表達的克隆，倒置顯微鏡觀察各組細胞形態(tài)學變化，RTPCR、Westonblot方法檢測轉染后SurvivinmRNA及蛋白的表達，噻唑藍（MTT）法、克隆形成實驗檢測細胞的增殖情況，吖啶橙
2、熒光染色法觀察細胞凋亡情況。［結果］轉染后MG63細胞Survivin基因mRNA水平和蛋白表達顯著下降，其抑制率分別為8508％和8114％；細胞增殖受到顯著抑制，培養(yǎng)48h后與空白組比較，抑制率達6341％；吖啶橙染色顯示轉染組細胞出現(xiàn)明顯核碎裂等凋亡改變，轉染組凋亡率為2454％。［結論］靶向Survivin基因的siRNA表達載體可以顯著抑制骨肉瘤細胞增殖，促進細胞凋亡。關鍵詞：Survivin；siRNA；短發(fā)夾狀RNA；骨肉瘤；細胞增殖；細胞凋亡Abstract：［Objective
3、］Toconstructanexpressionplasmidofa11shorthairpinRNAtargetingSurvivin,andinvestigateitseffectontheexpressionofSurvivin,theproliferationandtheapoptosisofhumanosteosarcomacelllineMG63invitro［Method］AplasmidofashorthairpinRNAtargetingSurvivinwasconstruct
4、ed,anditwastransferedintoMG63celllinebydosperliposomalmethodMorphologicalchangeoftumorcellswasobservedunderinvertmicroscopeTheexpressionofSurvivinmRNAandproteinwereexaminedbyRTPCRandWestonblotmethodrespectivelyTheinhibitionofthecellproliferationwases
5、timatedbyMTTmethodandthecolonyformingtestTheapoptoticcellswerestainedbyacridineorange［Result］Thenumberofdriftcellswasincreasedaftertransfection,SurvivinshRNAcouldsignificantlyreducetheexpressionsofSurvivinmRNAandproteinTheexpressionofSurvivinmRNAandp
6、roteinaftertransfectionwasrespectivelyinhibitedby8508%and8114%,SurvivinshRNAalsoinhibitthegrowthofthecellbyMTTmethodandtheinhibitionratereached6341%at48h,theapoptosisrateofthecellsinthetransfectedgroupwas2454%［Conclusion］SurvivinshRNAcouldsignificant
7、lyreducetheexpressionsofSurvivinmRNAandproteinandinhibittheproliferationoftheMG63cell,andincreasetheapoptosisofthecells11Keywords：Survivin;RNAinterference;ShorthairpinRNA;OsteosarcomaSurvivin是凋亡抑制蛋白（inhibitorofapoptosisprotein，IAP）家族新成員。它可以通過抑制凋亡途徑中的
8、casepase3和casepase7活性等途徑，抑制腫瘤細胞凋亡，促進腫瘤增殖〔1〕。為此，作者設計并構建了靶向Survivin基因的siRNA表達載體，轉染人骨肉瘤MG63細胞系，檢測其對骨肉瘤細胞增殖和凋亡的影響，為骨肉瘤的基因治療提供一個新的靶點和方向。1材料與方法11材料人骨肉瘤細胞系MG63為本教研室保存，Lipofectamine2000為Invitrogen公司產品，pSilence21neo為Ambin公司產品，購自武漢晶賽公司，RTPCR試劑盒為MBI公司產品，鼠抗人Surv
