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《臨床醫(yī)學(xué)論文-Survivin基因干擾RNA對骨肉瘤MG.doc》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、臨床醫(yī)學(xué)論文-Survivin基因干擾RNA對骨肉瘤MG作者：李鮑，楊述華，劉紅云，吳強，傅德皓【關(guān)鍵詞】骨肉瘤摘要：［H的］觀察Survivin基因siRNA表達(dá)載體對骨肉瘤細(xì)胞增殖和凋亡的影響。［方法］體外構(gòu)建SurvivinshRNA表達(dá)載體pSilence21neoSurvivin,轉(zhuǎn)染骨肉瘤細(xì)胞系MG63,篩選穩(wěn)定表達(dá)的克隆，倒置顯微鏡觀察各組細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化，RTPCR>Wcstonblot方法檢測轉(zhuǎn)染后SurvivinmRNA及蛋口的表達(dá)，曝卩坐藍(lán)（MTT）法、克隆形成實驗檢測細(xì)胞的增殖情況，叮喘橙熒光染色法觀察細(xì)胞凋亡情況。［結(jié)果］轉(zhuǎn)染后MG
2、63細(xì)胞Survivin基因mRNA水平和蛋白表達(dá)顯著下降，其抑制率分別為8508%和8114%；細(xì)胞增殖受到顯著抑制，培養(yǎng)48h后與空白組比較，抑制率達(dá)6341%；叮喘橙染色顯示轉(zhuǎn)染組細(xì)胞出現(xiàn)明顯核碎裂等凋亡改變，轉(zhuǎn)染組凋亡率為2454%o［結(jié)論］靶向Survivin基因的siRNA表達(dá)載體可以顯著抑制骨肉瘤細(xì)胞增殖，促進細(xì)胞凋亡。關(guān)鍵詞:Survivin；siRNA；短發(fā)夾狀RNA；骨肉瘤；細(xì)胞增殖；細(xì)胞凋亡Abstract：［Objective］ToconstructanexpressionplasmidofashorthairpinRNAtarge
3、tingSurvivin,andinvestigateitseffectontheexpressionofSurvivin,theproliferalionandtheapoptosisofhumanosteosarcomacel11ineMG63invitro［Method］AplasmidofashorthairpinRNAtargetingSurvivinwasconstrueted,anditwastransferedintoMG63ccl11incbydospcr1iposomalmethodMorphologicalchangeoftumorc
4、ellswasobservedunderinvertmicroscopeTheexpressionofSurvivinmRNAandproteinwereexaminedbyRTPCRandWestonblotmethodrespectivelyTheinhibitionofthecellprolifcrationwasestimatedbyMTTmethodandthecolonyforminglestTheapoptoticcellswerestainedbyacridineorange[Result]ThenumberofdrifIcellswasi
5、ncreasedaftertransfection,SurvivinshRNAcouldsignificantlyreducetheexpressionsofSurvivinmRNAandproleinTheexpressionofSurvivinmRNAandproteinaftertransfectionwasrespectivelyinhibitedby8508%and8114%,SurvivinshRNAalsoinhibitthegrowthofthecel1byMTTmethodandtheinhibitionratereached6341%a
6、t48h,theapoptosisrateofthecellsinthetransfectedgroupwas2454%[Conclusion]SurvivinshRNAcouldsignificantlyreducetheexpressionsofSurvivinmRNAandproteinandinhibittheprolifcrationoftheMG63cell,andincreasetheapoptosisofthecellsKeywords：Survivin;RNAinterference;ShorthairpinRNA;Osteosarcom
7、aSurvivin是凋亡抑制蛋白(inhibitorofapoptosisprotein,TAP)家族新成員。它可以通過抑制凋廣途徑屮的casepase3和casepase7活性等途徑，抑制腫瘤細(xì)胞凋亡，促進腫瘤增殖〔1)o為此，作者設(shè)計并構(gòu)建了靶向Survivin基因的siRNA表達(dá)載體，轉(zhuǎn)染人骨肉瘤MG63細(xì)胞系，檢測其對骨肉瘤細(xì)胞增殖和凋亡的影響，為骨肉瘤的基因治療提供一個新的靶點和方向。1材料與方法11材料人骨肉瘤細(xì)胞系MG63為本教研室保存，Lipofcctaminc2000為Invitrogcn公司產(chǎn)品，pSilence21neo為Ambin公
8、司產(chǎn)品，購自武漢晶賽公司，RTPCR試劑盒為MBI公司產(chǎn)品，鼠抗人
