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1、力竭運動后大鼠心肌的變色酸2R-亮綠染色【摘要】目的：研究力竭運動后心肌變色酸-2R亮綠染色的表現(xiàn)。方法：50只健康成年雄性SD大鼠隨機分為一次力竭運動組和對照組，力竭組進(jìn)行一次力竭游泳運動，運動后分別于即刻、6h、12h、24h取心室肌組織進(jìn)行石蠟切片及變色酸2R-亮綠染色。結(jié)果：一次力竭運動后各時相大鼠心肌變色酸2R-亮綠染色顯示心肌細(xì)胞漿存在點、片狀紅色缺血缺氧改變，以運動后6h最顯著。結(jié)論：變色酸-2R亮綠染色可以敏感地反應(yīng)運動性心肌微損傷的病理改變，可以作為建立運動性心肌微損傷實驗動物模型的評價指標(biāo)?！娟P(guān)鍵詞】力竭運動;運動性心肌微損傷;變色酸2R-亮
2、綠染色有研究發(fā)現(xiàn)，適量的運動能夠使心臟產(chǎn)生良好的適應(yīng)，有利于身體的健康，而過量的運動則有可能導(dǎo)致心肌供血不足，引起心肌損害，誘發(fā)心功能不全、電生理異常及心律失常，嚴(yán)重者甚至有可能引起猝死[1]?！ ∽兩?R-亮綠染色是一種檢測心肌缺血缺氧改變的敏感指標(biāo)，過去只是在心臟猝死患者的法醫(yī)學(xué)診斷和實驗性心肌缺血實驗動物模型中被廣泛使用，尚未引入到運動性心肌微損傷的研究中。本研究旨在探索力竭運動后心肌組織的病理改變及其時相性規(guī)律，同時也為運動性心肌微損傷實驗動物模型的建立尋找敏感有效的評價指標(biāo)。6 1材料與方法 1.1實驗動物和分組健康雄性成年SD大鼠50只(北京維
3、通利華公司提供)，體重(260±8)g。大鼠隨機分為5組，每組10只，其中一次力竭游泳運動4組，對照1組，各組間大鼠初始體重差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。國家標(biāo)準(zhǔn)嚙齒動物飼料喂養(yǎng)，自由飲食。飼養(yǎng)環(huán)境為室溫(20±2)℃，光照時間12h，相對濕度40%～55%。 1.2實驗方法 1.2.1力竭游泳運動采用PVC特制泳池，規(guī)格為1.6m×0.8m×1.2m，內(nèi)壁光滑，水深約60cm，超過大鼠身長2倍，控制水溫在30～33℃。運動組大鼠進(jìn)入動物房后首先適應(yīng)3d，然后進(jìn)行2d適應(yīng)性游泳運動(20min/次)，每次運動后迅速用干毛巾擦干水分，電吹風(fēng)吹干后，放
4、回籠中休息，第3天尾部負(fù)重3%體重進(jìn)行一次力竭運動，力竭標(biāo)準(zhǔn)參照Thomas等[2]的報道?！ ?.2.2大鼠心肌取材一次力竭運動組分別于運動后0、6、12、24h取材，對照組與運動后即刻組同時取材。大鼠腹腔注射10%水合氯醛(1mL/1006g體重)麻醉后，開胸迅速取出心臟，經(jīng)滅菌生理鹽水清洗后，迅速垂直于心臟長軸切取心肌組織投入福爾馬林液固定24h，于石蠟切片機切取5μm厚的石蠟切片備用?！ ?.2.3HE染色將石蠟切片依次脫蠟、水化、蘇木素染色、分化、反藍(lán)、伊紅染色、脫水、透明、封片，制成HE染色的切片?！ ?.2.4心肌缺血缺氧特異性染色——變色酸2R-
5、亮綠染色石蠟切片脫蠟至水化后，入變色酸2R染液染色10min后直接用0.2%冰醋酸水溶液洗2～3次，然后入0.5%亮綠冰醋酸染液復(fù)染10min，自來水洗2min，然后脫水、透明、封片。 2結(jié)果 對照組大鼠心肌纖維形態(tài)結(jié)構(gòu)正常，HE染色顯示心肌纖維結(jié)構(gòu)清晰，著色均勻，肌纖維呈短柱狀，分支相互連接成網(wǎng)，細(xì)胞核呈卵圓形，大小均勻，位于心肌纖維的中央;變色酸2R-亮綠染色顯示心肌纖維呈綠色，細(xì)胞核呈深藍(lán)色,未見紅色缺血缺氧改變。見圖1?！ D1對照組大鼠心肌纖維HE染色形態(tài)結(jié)構(gòu)(400×) ?、贋檎Ｐ募E染色，②為正常心肌變色酸2R-亮綠染色 一次力竭運動后即
6、刻組和66h組大鼠心肌纖維可見明顯形態(tài)結(jié)構(gòu)異常和缺血缺氧改變，尤以6h組為甚。HE染色顯示心肌組織出現(xiàn)不同層次的嗜酸性紅染區(qū)，著色不均勻，心肌纖維結(jié)構(gòu)不清晰，橫紋模糊，細(xì)胞邊界模糊不清，并有不同程度的細(xì)胞濁腫和局限性間質(zhì)水腫等改變見圖2-①，在12h組和24h組以上情況有不同程度的減輕;變色酸2R-亮綠染色顯示各組心肌細(xì)胞漿均存在點、片狀紅色缺血缺氧改變，見圖2-②，尤其在運動后6h組心肌紅色缺血缺氧改變成大面積片狀，顯示心肌損傷程度大于其他時相組，運動后12h組程度有所減輕，運動后24h組進(jìn)一步減輕?！ ?討論 有研究報道，急性力竭運動對機體產(chǎn)生的不利影響，
7、常導(dǎo)致運動性疲勞與損傷的發(fā)生，尤其是運動性心肌微損傷[3-5]。本研究心肌HE染色表現(xiàn)與常蕓[6]的研究基本一致，急性力竭運動后即刻心肌組織出現(xiàn)缺血、缺氧改變，運動后6h改變更加顯著，運動后12h、246h改變有不同程度的減輕。運動后心肌組織變色酸2R-亮綠染色的表現(xiàn)為缺血心肌呈點、片狀紅色改變，與李成庫[7]對心血管病猝死的尸檢心肌和實驗性心肌缺血動物材料采用變色酸2R-亮綠染色法染色的結(jié)果一致。運動后心肌組織變色酸2R-亮綠染色的表現(xiàn)亦存在時相性的變化規(guī)律，且與HE染色一致。研究表明力竭運動所致的心肌微損傷在運動停止后有進(jìn)一步加強的趨勢，這與臨床上心肌缺血再
8、灌注損傷的規(guī)律相一致，也
