資源描述：
《復(fù)方通絡(luò)膠囊對人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞損傷的保護(hù)作用》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、復(fù)方通絡(luò)膠囊對人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞損傷的保護(hù)作用【摘要】目的 觀察復(fù)方通絡(luò)膠囊對缺氧-復(fù)氧所致人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)損傷的保護(hù)作用。方法體外培養(yǎng)HUVECs，建立缺氧-復(fù)氧模型，倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)，采用MTT法測定細(xì)胞存活力，檢測細(xì)胞培養(yǎng)液中乳酸脫氫酶(LDH)水平。結(jié)果復(fù)方通絡(luò)膠囊能明顯減輕缺氧-復(fù)氧所致細(xì)胞形態(tài)學(xué)的改變、抑制內(nèi)皮細(xì)胞損傷、明顯減少LDH的釋放(P<0.05，P<0.01)。結(jié)論復(fù)方通絡(luò)膠囊對HUVECs損傷有明顯的保護(hù)作用?！娟P(guān)鍵詞】復(fù)方通絡(luò)膠囊;內(nèi)皮細(xì)胞;缺氧-復(fù)氧;保護(hù)作用 ToobservetheprotectiveeffectofFufang
2、tongluocapsuleonhumanumbilicalveinendothelialcells(HUVECs)injurycausedbyhypoxia-reoxygenation.MethodsHUVECswereculturedinvitrotobuildthehypoxic-reoxygenationmodel，thenweobservedcellmorphologybyinvertedmicroscope，anddeterminatedcellviabilitybyMTT，anddetectedlactatedehydrogenase(LDH)levelincellculture
3、medium.ResultsFufangtongluocapsulecansignificantlyinhibitcellmorphologychangeandendothelialcellinjurycausedbyhypoxia-reoxygenationandeffectivelyreduceLDHrelease(P<0.05，P<0.01).Conclusion8Fufangtongluocapsulehasobviouslyprotectiveeffectonhumanumbilicalveinendothelialcellsinjury. [Keywords]fufa
4、ngtongluocapsule;endothelialcells;hypoxia-reoxygenation;protectiveeffect 缺氧-復(fù)氧在卒中、心肌缺血等疾病病理生理過程中扮演著重要角色[1]。復(fù)方通絡(luò)膠囊是以滋養(yǎng)肝腎、化痰消瘀為法所制定的中藥復(fù)方，由首烏、黃精、海藻、僵蠶、天麻等組成。前期研究表明其對大腦中動脈缺血再灌注(MCAO)大鼠有預(yù)防性腦保護(hù)作用。本研究通過體外培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)，建立缺氧-復(fù)氧模型，觀察細(xì)胞形態(tài)，采用MTT法測定細(xì)胞存活力，檢測細(xì)胞培養(yǎng)液中LDH水平，探討其對血管內(nèi)皮細(xì)胞是否有保護(hù)作用?！ ?材料與方法 1.1藥品、試劑復(fù)方
5、通絡(luò)膠囊，生藥1.5g/ml，南京市中醫(yī)院提供;丹參注射液，正大青春寶藥業(yè)有限公司，批號：0502181;RPMI1640培養(yǎng)基，Gibco產(chǎn)品;完全DMEM培養(yǎng)基，Gibco產(chǎn)品;二甲基亞砜 (DMSO)，上海凌峰化學(xué)試劑有限公司;新生牛血清，杭州四季青生物工程材料有限公司，批號：051120;胰蛋白酶(1∶8250)，Amresco分裝;乳酸脫氫酶(LDH)試劑盒，南京建成生物工程研究所，批號：20050304;連二亞硫酸鈉(Na2S2O4)，上?；瘜W(xué)試劑采購站經(jīng)銷，批號90878;MTT[溴化-(4，5-二甲-2-噻唑基)-2，5-二苯基四氮唑]，Amresco分裝?！ ?.2儀器CK
6、40倒置顯微鏡，OLYMPUS，JAPAN;超凈工作臺，蘇州凈化設(shè)備廠;DG3022A型酶聯(lián)免疫檢測儀，華東電子管廠產(chǎn)品;752分光光度計(jì)，上海光譜儀器有限公司?！ ?.3實(shí)驗(yàn)細(xì)胞HUVECs細(xì)胞，購于中科院上海細(xì)胞庫?！ ?.4方法 1.4.1HUVECs的培養(yǎng)及氧化損傷模型的建立HUVECs按常規(guī)方法復(fù)蘇后接種于40ml培養(yǎng)瓶中，培養(yǎng)液為含10%新生牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液，37℃、95%O2、5%CO2條件下培養(yǎng)，待細(xì)胞長滿瓶底后，倒掉培養(yǎng)液，用PBS輕輕蕩洗兩次，加入0.25%胰蛋白酶37℃消化2～3min，用新生牛血清終止消化，吸管輕輕吹打數(shù)次，使細(xì)胞完全分散，倒置顯微鏡下觀
7、察，計(jì)數(shù)，將細(xì)胞濃度調(diào)整為1×108個/L的細(xì)胞懸液，接種于細(xì)胞培養(yǎng)板上(96孔、24孔)同樣條件下繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長滿單層融合后，棄去上清，以含0.5%血清的培養(yǎng)液培養(yǎng)248h，使其同步化生長。HUVECs同步化生長后，換用無血清的1640培養(yǎng)液，除正常對照組外加入終濃度為1mmol/L的Na2S2O420μl作用2h，吸去培養(yǎng)液，用D-Hank’s液洗兩次，然后加入無血清的DMEM200μl，
