資源描述：
《復方通絡膠囊對人臍靜脈內(nèi)皮細胞損傷的保護作用》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在應用文檔-天天文庫。
1、復方通絡膠囊對人臍靜脈內(nèi)皮細胞損傷的保護作用【關(guān)鍵詞】復方通絡膠囊;內(nèi)皮細胞;缺氧-復氧;保護作用 ToobservetheprotectiveeffectofFufangtongluocapsuleonhumanumbilicalveinendothelialcells(HUVECs)injurycausedbyhypoxia-reoxygenation.MethodsHUVECsodel，thenorphologybyinvertedmicroscope，anddeterminatedcellviabilitybyMTT，anddetectedlacta
2、tedehydrogenase(LDH)levelincellculturemedium.ResultsFufangtongluocapsulecansignificantlyinhibitcellmorphologychangeandendothelialcellinjurycausedbyhypoxia-reoxygenationandeffectivelyreduceLDHrelease(P<0.05，P<0.01).ConclusionFufangtongluocapsulehasobviouslyprotectiveeffectonhum
3、anumbilicalveinendothelialcellsinjury. [Keyl，南京市中醫(yī)院提供;丹參注射液，正大青春寶藥業(yè)有限公司，批號：0502181;RPMI1640培養(yǎng)基，Gibco產(chǎn)品;完全DMEM培養(yǎng)基，Gibco產(chǎn)品;二甲基亞砜 (DMSO)，上海凌峰化學試劑有限公司;新生牛血清，杭州四季青生物工程材料有限公司，批號：051120;胰蛋白酶(1∶250)，Amresco分裝;乳酸脫氫酶(LDH)試劑盒，南京建成生物工程研究所，批號：20050304;連二亞硫酸鈉(Na2S2O4)，上海化學試劑采購站經(jīng)銷，批號90878;MTT[溴化
4、-(4，5-二甲-2-噻唑基)-2，5-二苯基四氮唑]，Amresco分裝?！ ?.2儀器CK40倒置顯微鏡，OLYMPUS，JAPAN;超凈工作臺，蘇州凈化設備廠;DG3022A型酶聯(lián)免疫檢測儀，華東電子管廠產(chǎn)品;752分光光度計，上海光譜儀器有限公司?！ ?.3實驗細胞HUVECs細胞，購于中科院上海細胞庫?！ ?.4方法 1.4.1HUVECs的培養(yǎng)及氧化損傷模型的建立HUVECs按常規(guī)方法復蘇后接種于40ml培養(yǎng)瓶中，培養(yǎng)液為含10%新生牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液，37℃、95%O2、5%CO2條件下培養(yǎng)，待細胞長滿瓶底后，倒掉培養(yǎng)液，用PBS輕
5、輕蕩洗兩次，加入0.25%胰蛋白酶37℃消化2～3min，用新生牛血清終止消化，吸管輕輕吹打數(shù)次，使細胞完全分散，倒置顯微鏡下觀察，計數(shù)，將細胞濃度調(diào)整為1×108個/L的細胞懸液，接種于細胞培養(yǎng)板上(96孔、24孔)同樣條件下繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長滿單層融合后，棄去上清，以含0.5%血清的培養(yǎng)液培養(yǎng)24h，使其同步化生長。HUVECs同步化生長后，換用無血清的1640培養(yǎng)液，除正常對照組外加入終濃度為1mmol/L的Na2S2O420μl作用2h，吸去培養(yǎng)液，用D-Hank’s液洗兩次，然后加入無血清的DMEM200μl，繼續(xù)培養(yǎng)24h。 1.4.2MTT比色
6、法檢測細胞存活力96孔板每孔加入MTT溶液(5mg/ml)20μl，37℃繼續(xù)培養(yǎng)4h。吸去上清液終止培養(yǎng)后，每孔加入150μlDMSO，振蕩5min，在酶聯(lián)免疫檢測儀上，570nm波長處測定各孔吸光度(OD值)。并根據(jù)下列公式計算藥物對缺氧引起的內(nèi)皮細胞損傷的抑制率： 抑制率=(OD給藥組-OD模型組)/(OD對照組-OD模型組)×100% 1.4.3LDH活性測定各組HUVECs經(jīng)缺氧處理后，收集培養(yǎng)液，參照南京建成生物工程公司LDH檢測試劑盒說明檢測。 1.5實驗分組(1)正常對照組：加入無血清的1640培養(yǎng)液3ml，正常條件下培養(yǎng)32h。(2)模
7、型組：加入無血清的1640培養(yǎng)液3ml，缺氧24h，復氧8h;各給藥組預先加入不同濃度的藥物預孵1h，然后按模型組處理。(3)丹參注射液組：丹參注射液(終濃度為3.0g/L)，復氧8h。(4)復方通絡膠囊組：復方通絡膠囊終濃度為1×10-4g/L，復氧8h。(5)復方通絡膠囊Ⅱ組：復方通絡膠囊終濃度為1×10-5g/L，復氧8h;(6)復方通絡膠囊Ⅲ組：復方通絡膠囊終濃度為1×10-6g/L，復氧8h?！ ?.6統(tǒng)計學處理數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差(〖x〗±s)表示，結(jié)果進行組間比較，采用t檢驗?！ ?.2對HUVECs細胞存活率的影響模型組細胞經(jīng)缺氧-復氧處理后，O
8、D570值明顯降低，復方通絡膠囊中、高
