多西他賽聯(lián)合放療對(duì)大鼠脊髓損傷的觀察

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1、多西他賽聯(lián)合放療對(duì)大鼠脊髓損傷的觀察作者：楊月琴，金偉，鄒麗娟，趙瑾瑤，邵淑娟【摘要】目的探討多西他賽聯(lián)合放射治療對(duì)大鼠脊髓損傷的影響。方法將40只Wistar品系大鼠隨機(jī)分為5個(gè)組，即空白組、多西他賽組、放療組、先多西他賽后放療組和先放療后多西他賽組。多西他賽組單次腹腔注射多西他賽5mg/kg。放療組、先多西他賽后放療組和先放療后多西他賽組采用Varian2300C/D直線加速器6MeV電子線照射大鼠胸段脊髓，照射野為2cm×4cm，5Gy/次，隔日1次，總劑量為40Gy。聯(lián)合組多西他賽與照射的間隔時(shí)間為3d。照射結(jié)束后5個(gè)月，行活體灌注固定，取材，

2、光鏡和電鏡觀察脊髓的形態(tài)學(xué)變化。結(jié)果光鏡下，放療組和先多西他賽后放療組白質(zhì)部分壞死；先放療后多西他賽組白質(zhì)大片壞死。后2組均見(jiàn)膠質(zhì)細(xì)胞核固縮。各組灰質(zhì)內(nèi)神經(jīng)元和血管未見(jiàn)變化。電鏡下，各組脊髓髓鞘改變程度不一。放療組脊髓髓鞘板層結(jié)構(gòu)水腫、粘連，模糊不清。先多西他賽后放療組的脊髓髓鞘的板層結(jié)構(gòu)部分松解、扭曲；膠質(zhì)細(xì)胞核固縮。先放療后多西他賽組脊髓損傷髓鞘的板層結(jié)構(gòu)大部分松解、扭曲、斷裂；細(xì)胞器嚴(yán)重變形；膠質(zhì)細(xì)胞凋亡。各組血管均未見(jiàn)明顯改變。結(jié)論多西他賽與放療聯(lián)用明顯加重脊髓損傷，且放療后加用多西他賽脊髓損傷加重。【關(guān)鍵詞】脊髓損傷；化學(xué)療法；多西他賽；放射

3、療法9Keywords：Spinalcordinjury；Chemotherapy；Docetaxel；Radiotherapy目前，用于和放療聯(lián)合治療腫瘤的化療藥物很多，其中多西他賽(docetaxel)是抑制各種腫瘤效果較好的化學(xué)試劑，臨床上單獨(dú)或與其他化療藥物合用與放療聯(lián)合成為多種癌瘤的主要治療方案[14]；但多西他賽合并脊髓區(qū)放療對(duì)脊髓損傷影響的資料較少。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)Wistar大鼠觀察多西他賽合并脊髓區(qū)放療的脊髓損傷程度，為臨床多西他賽并用放療提供理論指導(dǎo)依據(jù)。1材料與方法1.1主要藥品與設(shè)備多西他賽（齊魯制藥有限公司，20mg/支）、蘇木素

4、、伊紅、戊二醛、四氧化俄、Epon812包埋液、LA40模擬定位機(jī)、Varian2300C/D醫(yī)用直線加速器、AVS410滑臺(tái)切片機(jī)、OLYMPUS光學(xué)顯微鏡、KLBⅤ型超薄切片機(jī)、JEM3000EX透射電子顯微鏡。1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與分組9本實(shí)驗(yàn)采用大連醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供的Wistar品系健康雄性大鼠40只，體重(220±34)g，按組間均衡設(shè)計(jì)，分為空白組、多西他賽組、放療組、先多西他賽后放療組和先放療后多西他賽組，以體重進(jìn)行均衡檢驗(yàn)后，5組間無(wú)差異。1.3注射和照射方法在放射治療前3天對(duì)多西他賽組和先多西他賽后放療組大鼠單次腹腔注射do

5、cetaxel5mg/kg。3天后，分別對(duì)放療組、先多西他賽后放療組和先放療后多西他賽組3組大鼠進(jìn)行照射。用自制的固定裝置固定大鼠，在模擬定位機(jī)下拍正位和側(cè)位X片，測(cè)出脊髓的深度，同時(shí)確定胸段照射范圍，左右寬度包括整個(gè)椎體，射野大小為2cm×4cm，用放療科專(zhuān)用藥水在大鼠照射野中心剪毛后作標(biāo)記，使每次照射都能重復(fù)相同的照射范圍。采用加速器的6MeV電子線照射，單次照射劑量為5Gy，根據(jù)脊髓的深度換算出6MeV照射時(shí)的機(jī)器跳數(shù)，劑量率為300cGy/min，固定源皮距（SSD）技術(shù)照射，SSD=100cm，隔日1次，共8次，照射總劑量為40Gy。8次照射

6、結(jié)束后3天，先放療后多西他賽組大鼠單次腹腔注射docetaxel5mg/kg。1.4取材于照射結(jié)束后5個(gè)月，用93%戊巴比妥鈉30mg/kg腹腔注射麻醉大鼠，用4%多聚甲醛加1.25%的戊二醛進(jìn)行活體灌注，從背部暴露脊髓，小心分離出照射部位脊髓，分成2段，上段切成約1cm3的組織塊固定于5%福爾馬林溶液中；下段切成約1mm3的組織塊固定于2.5%戊二醛中。1.5光鏡觀察將固定于5%福爾馬林溶液中的脊髓組織塊，經(jīng)乙醇脫水，二甲苯透明，石蠟切片，HE染色，光鏡觀察。1.6電鏡觀察將固定于2%戊二醛中的脊髓組織塊，經(jīng)1%俄酸雙固定，磷酸緩沖液清洗，乙醇脫水，

7、Epon812包埋液常規(guī)浸透、包埋，半薄切片，經(jīng)甲苯胺藍(lán)染色，光鏡下定位，超薄切片，再經(jīng)鈾鉛鹽雙染色，透射電鏡下觀察。2結(jié)果2.1光鏡觀察各組脊髓形態(tài)變化9光鏡下，空白組的大鼠脊髓白質(zhì)（圖1）和灰質(zhì)（圖2）。多西他賽組白質(zhì)內(nèi)部分有髓神經(jīng)纖維排列紊亂（圖３）。放療組灰質(zhì)內(nèi)神經(jīng)元、膠質(zhì)細(xì)胞、血管未見(jiàn)明顯改變（圖４），白質(zhì)出現(xiàn)部分壞死（圖５）。先多西他賽后放療組白質(zhì)部分壞死（圖６）；灰質(zhì)內(nèi)神經(jīng)元、血管未見(jiàn)明顯改變，膠質(zhì)細(xì)胞核固縮（圖７）。先放療后多西他賽組白質(zhì)出現(xiàn)大片壞死（圖８），灰質(zhì)內(nèi)膠質(zhì)細(xì)胞核固縮，神經(jīng)元、血管未見(jiàn)明顯改變（圖９）。2.2電鏡觀察各組脊

8、髓病理變化空白組正常大鼠脊髓髓鞘為同心圓板層排列，密實(shí)有序，線粒體飽滿（圖10）。多西他賽組部