多西他賽聯(lián)合放療對大鼠脊髓損傷的觀察

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1、多西他賽聯(lián)合放療對大鼠脊髓損傷的觀察作者：楊月琴，金偉，鄒麗娟，趙瑾瑤，邵淑娟【摘要】目的探討多西他賽聯(lián)合放射治療對大鼠脊髓損傷的影響。方法將40只eV電子線照射大鼠胸段脊髓，照射野為2cm×4cm，5Gy/次，隔日1次，總劑量為40Gy。聯(lián)合組多西他賽與照射的間隔時(shí)間為3d。照射結(jié)束后5個(gè)月，行活體灌注固定，取材，光鏡和電鏡觀察脊髓的形態(tài)學(xué)變化。結(jié)果光鏡下，放療組和先多西他賽后放療組白質(zhì)部分壞死；先放療后多西他賽組白質(zhì)大片壞死。后2組均見膠質(zhì)細(xì)胞核固縮。各組灰質(zhì)內(nèi)神經(jīng)元和血管未見變化。電鏡下，各組脊髓髓鞘改變程度不一。放療組脊髓髓鞘板層結(jié)構(gòu)水腫、粘連，模糊不清。先多西他賽后

2、放療組的脊髓髓鞘的板層結(jié)構(gòu)部分松解、扭曲；膠質(zhì)細(xì)胞核固縮。先放療后多西他賽組脊髓損傷髓鞘的板層結(jié)構(gòu)大部分松解、扭曲、斷裂；細(xì)胞器嚴(yán)重變形；膠質(zhì)細(xì)胞凋亡。各組血管均未見明顯改變。結(jié)論多西他賽與放療聯(lián)用明顯加重脊髓損傷，且放療后加用多西他賽脊髓損傷加重?！娟P(guān)鍵詞】脊髓損傷；化學(xué)療法；多西他賽；放射療法Keyotherapy；Docetaxel；Radiotherapy目前，用于和放療聯(lián)合治療腫瘤的化療藥物很多，其中多西他賽(docetaxel)是抑制各種腫瘤效果較好的化學(xué)試劑，臨床上單獨(dú)或與其他化療藥物合用與放療聯(lián)合成為多種癌瘤的主要治療方案[14]；但多西他賽合并脊髓區(qū)放療對

3、脊髓損傷影響的資料較少。本實(shí)驗(yàn)通過PUS光學(xué)顯微鏡、KLBⅤ型超薄切片機(jī)、JEM3000EX透射電子顯微鏡。1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與分組本實(shí)驗(yàn)采用大連醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供的eV電子線照射，單次照射劑量為5Gy，根據(jù)脊髓的深度換算出6MeV照射時(shí)的機(jī)器跳數(shù)，劑量率為300cGy/min，固定源皮距（SSD）技術(shù)照射，SSD=100cm，隔日1次，共8次，照射總劑量為40Gy。8次照射結(jié)束后3天，先放療后多西他賽組大鼠單次腹腔注射docetaxel5mg/kg。1.4取材于照射結(jié)束后5個(gè)月，用3%戊巴比妥鈉30mg/kg腹腔注射麻醉大鼠，用4%多聚甲醛加1.25%的戊二醛進(jìn)行活體

4、灌注，從背部暴露脊髓，小心分離出照射部位脊髓，分成2段，上段切成約1cm3的組織塊固定于5%福爾馬林溶液中；下段切成約1mm3的組織塊固定于2.5%戊二醛中。1.5光鏡觀察將固定于5%福爾馬林溶液中的脊髓組織塊，經(jīng)乙醇脫水，二甲苯透明，石蠟切片，HE染色，光鏡觀察。1.6電鏡觀察將固定于2%戊二醛中的脊髓組織塊，經(jīng)1%俄酸雙固定，磷酸緩沖液清洗，乙醇脫水，Epon812包埋液常規(guī)浸透、包埋，半薄切片，經(jīng)甲苯胺藍(lán)染色，光鏡下定位，超薄切片，再經(jīng)鈾鉛鹽雙染色，透射電鏡下觀察。2結(jié)果2.1光鏡觀察各組脊髓形態(tài)變化光鏡下，空白組的大鼠脊髓白質(zhì)（圖1）和灰質(zhì)（圖2）。多西他賽組白質(zhì)內(nèi)

5、部分有髓神經(jīng)纖維排列紊亂（圖３）。放療組灰質(zhì)內(nèi)神經(jīng)元、膠質(zhì)細(xì)胞、血管未見明顯改變（圖４），白質(zhì)出現(xiàn)部分壞死（圖５）。先多西他賽后放療組白質(zhì)部分壞死（圖６）；灰質(zhì)內(nèi)神經(jīng)元、血管未見明顯改變，膠質(zhì)細(xì)胞核固縮（圖７）。先放療后多西他賽組白質(zhì)出現(xiàn)大片壞死（圖８），灰質(zhì)內(nèi)膠質(zhì)細(xì)胞核固縮，神經(jīng)元、血管未見明顯改變（圖９）。2.2電鏡觀察各組脊髓病理變化空白組正常大鼠脊髓髓鞘為同心圓板層排列，密實(shí)有序，線粒體飽滿（圖10）。多西他賽組部分髓鞘結(jié)構(gòu)出現(xiàn)板層結(jié)構(gòu)松解、扭曲等輕度變化，細(xì)胞器相對完好。放療組髓鞘的板層結(jié)構(gòu)水腫、粘連，模糊不清（圖11），血管未見改變（圖12）。先多西他賽后放療組髓

6、鞘的板層結(jié)構(gòu)部分松散(圖13)；膠質(zhì)細(xì)胞核固縮（圖14）；血管未見改變（圖15）。先放療后多西他賽組脊髓損傷程度嚴(yán)重，表現(xiàn)為正常髓鞘的板層結(jié)構(gòu)大部分松解、扭曲、斷裂；細(xì)胞器嚴(yán)重變形（圖16）；膠質(zhì)細(xì)胞凋亡（圖17）；血管未見改變（圖18）。3討論脊髓放射性損傷是放射治療的晚反應(yīng)之一。由于它危害大，而且具有不可逆性，越來越引起人們的重視。但是由于脊髓的放射性損傷出現(xiàn)的時(shí)間晚，研究周期長，目前資料較少[5]。本實(shí)驗(yàn)觀察大鼠放射后脊髓損傷改變的結(jié)果表明，每次5Gy、隔日1次、總劑量40Gy的分次方案，總劑量雖然低于脊髓的耐受劑量45Gy，仍然導(dǎo)致了比較嚴(yán)重的脊髓損傷，符合脊髓是晚反

7、應(yīng)組織，對大的分次劑量敏感的特征，即大的分次劑量降低了脊髓的耐受量[6,7]。脊髓放射性損傷主要發(fā)生在白質(zhì)，光鏡下表現(xiàn)為部分白質(zhì)壞死，電鏡下表現(xiàn)為髓鞘板層結(jié)構(gòu)水腫、粘連，模糊不清，灰質(zhì)和血管未見明顯改變。放化療聯(lián)合實(shí)驗(yàn)組結(jié)果表明：多西他賽和放療合用組脊髓損傷比單純多西他賽組和單純放療組脊髓損傷加重，并且先放療后多西他賽組脊髓損傷比先多西他賽后放療組重，表現(xiàn)為大片白質(zhì)壞死；超微結(jié)構(gòu)可見髓鞘板層結(jié)構(gòu)大部分松解、扭曲、斷裂；細(xì)胞器嚴(yán)重圖10空白組大鼠脊髓髓鞘超微結(jié)構(gòu)(標(biāo)尺200nm)圖11放療組大鼠脊髓髓鞘超