tgfβ1、tgfβr1、smad4在乳腺癌發(fā)生、發(fā)展中的作用及其相互關(guān)系

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1、TGFβ1、TGFβR1、Smad4在乳腺癌發(fā)生、發(fā)展中的作用及其相互關(guān)系作者：夏立平，劉曉力，陳國(guó)平，鄭武平，何冬雷，高炳玉【摘要】　　目的：探討TGFβ1、TGFβR1及Smad4三者在乳腺癌中的表達(dá)與其發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移等生物學(xué)行為以及預(yù)后的關(guān)系，為乳腺癌發(fā)病和治療機(jī)制提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法：提取30例乳腺癌臨床標(biāo)本（經(jīng)液氮、研磨等處理）和MCF7、T47D、SKBR3三種乳腺癌細(xì)胞（取指數(shù)增長(zhǎng)期細(xì)胞）總RNA，反轉(zhuǎn)錄cDNA第一鏈，克隆TGFβR1、Smad4基因片段，測(cè)定質(zhì)粒濃度，制備標(biāo)準(zhǔn)樣品，并作出

2、標(biāo)準(zhǔn)曲線，探針?lè)晒舛縋CR（FQPCR）檢測(cè)TGFβR1和Smad4基因mRNA表達(dá)。結(jié)果：FQPCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)惡性程度高的SKBR3細(xì)胞，其TGFβR1和Smad4的基因拷貝數(shù)明顯低于惡性程度低的MCF7細(xì)胞（P均＜0.01），T47細(xì)胞兩種基因拷貝數(shù)介于兩者之間。結(jié)論：隨著乳腺癌細(xì)胞病理類型惡性程度增加，TGFβR1和Smad4mRNA表達(dá)逐步下降，表明TGFβ1和Smad4可能具有類似乳腺癌抑癌基因的作用。【關(guān)鍵詞】轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1;轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1受體;Smad4;乳腺癌　?。跘BSTRACT］Ob

3、jective:Toinvestigatetheexpressionof17TGFβ1,TGFβR1andAmad4proteinsandtherelationshiptotheinitiation,progression,metaptosisandprognosisofbreastcancer.Methods:Thesamplesof30casesand3celllines(MCF7,T47D,SKBR3)ofbreastcancerwereselected,andthetotalmRNAwasextracted.

4、Reversetranscription,andTGFβR1andSmad4genescloningwerecarriedout.Thentheconcentrationofplasmidwasmeasured,standardcurvewasmade,andtheexpressionofTGFβR1andSmad4mRNAswereassayedbyFQPCRmachine.Results:ThegenecopiesofTGFβR1andSmad4inSKBR3cellswerelowerthanthatinMC

5、F7cells(P＜0.01)andthegenecopiesinT47wasmiddle.Conclusions:OurstudiesbyFQPCRshowthatthelowerTGFβR1andSmad4mRNAsexpression,theworsebiologycharacteristicofbreastcancer,whichindicateTGFβR1andSmad4actpossiblyastheroleofantioncogeneinbreastcancer.　?。跭EYWORDS］TGFβ1;

6、TGFβR1;Smad4;Breastcancer17　　乳腺癌是女性常見(jiàn)惡性腫瘤之一，全世界每年約有120萬(wàn)婦女患乳腺癌。目前，乳腺癌病因尚不十分清楚，發(fā)病機(jī)理非常復(fù)雜，涉及多個(gè)因素的作用。多數(shù)研究認(rèn)為，乳腺癌的發(fā)生是因?yàn)樵┗虻募せ詈鸵职┗虻墓δ軉适?，其發(fā)展是一個(gè)多因素多階段的過(guò)程，往往涉及多個(gè)基因的改變［1,2］。TGFβ/Smads信號(hào)傳導(dǎo)通路及其與腫瘤關(guān)系多見(jiàn)于胰腺癌、婦科腫瘤等［3,4］，而在乳腺癌中TGFβ1、TGFβR1及Smad4三者的表達(dá)及其相互關(guān)系如何，它們對(duì)乳腺癌發(fā)生、發(fā)展有何意義，目前還

7、不完全清楚。本實(shí)驗(yàn)擬采用熒光定量PCR(fluorescentquantitationpolymerasechainreaction，F(xiàn)QPCR)、免疫組織化學(xué)/免疫細(xì)胞化學(xué)、WesternBlotting等技術(shù)，檢測(cè)乳腺癌患者和乳腺癌細(xì)胞株中的TGFβ1、TGFβR1和Smad4在mRNA水平和蛋白水平表達(dá)，進(jìn)一步深入三者在乳腺癌中的表達(dá)與其發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移等生物學(xué)行為以及預(yù)后的關(guān)系，為探討TGFβ信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)程提供新的思路，同時(shí)為乳腺癌的Smad4基因?qū)胫委?，以及嘗試應(yīng)用iRNA技術(shù)，提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)　　1材料

8、與方法　　1.1材料　　1.1.1標(biāo)本和細(xì)胞　　本組乳腺癌臨床標(biāo)本共30例，全部為海南醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院2005年1月～2008年12月門(mén)診或住院患者，其中外科手術(shù)切除標(biāo)本25例，病理活檢標(biāo)本5例?；颊吣挲g24～60歲，中位年齡43歲；按照病理學(xué)類型分為非浸潤(rùn)性癌4例、早期浸潤(rùn)性癌6及浸潤(rùn)性癌