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1、土壤酶活性測定方法一、蔗糖酶:3，5-二硝基水楊酸比色法1.試劑配制（1）2N氫氧化鈉200mL：稱取16g氫氧化鈉，用蒸餾水溶解，定溶于200mL容量瓶中。（2）3，5-二硝基水楊酸溶液1000mL：稱5g二硝基水楊酸，溶于200mL2N氫氧化鈉和500mL蒸餾水中，再加300g酒石酸鉀鈉，用蒸餾水稀釋至1000mL（不超過7天）。（3）1/15M磷酸氫二鈉1000mL：23.867gNa2HPO4·12H2O溶于1000mL蒸餾水中。（4）1/15M磷酸二氫鉀1000mL：9.078gKH2PO4溶于1000mL蒸餾水中。
2、（5）pH5.5磷酸緩沖液100mL：5mL磷酸氫二鈉(1/15M)加95mL磷酸二氫鉀(1/15M)（6）8%蔗糖1000mL：稱取80g蔗糖，用水溶解，稀釋至1000mL。（7）甲苯。（8）標準葡萄糖溶液（1mg/mL）1000mL：取少量葡萄糖在真空干燥箱中，于55℃條件下真空干燥至恒重。然后取1.00g葡萄糖溶于100ml蒸餾水中成標準葡萄糖母液（10mg還原糖/ml）。取此母液10ml,用蒸餾水定容至100mL即成標準葡萄糖液（1mg/ml）；2.操作步驟（1）標準曲線繪制：分別取標準葡萄糖液0.4mL，0.8mL，
3、1.2mL,1.6mL,2.0mL,2.8mL,3.2mL于50mL比色管中，另取一管做空白對照。用蒸餾水補足至10mL。加入3.0mL3，5-二硝基水楊酸，沸水浴5min，隨即在自來水流下冷卻。最后用蒸餾水稀釋至50mL，并在分光光度計上于波長508nm處進行比色。比色后，以光密度值為縱坐標，葡萄糖濃度為橫坐標繪制成標準曲線。（2）土壤蔗糖酶活性測定：稱5.00g土樣，置于50mL三角瓶中，注入15.0mL8%蔗糖溶液，5.0mLpH5.5磷酸緩沖液和5滴甲苯。搖勻混合物后，放入恒溫箱，在37℃下培養(yǎng)24h。到時取出，600
4、0rpm離心10min。取1.0mL上清液（新鮮土樣所吸取的上清液體積為1.0mL；風干土及保存1個月的土樣所吸取的上清液體積為0.5mL）于50mL比色管中，然后按繪制標準曲線顯色方法進行比色測定。為消除土壤中原有的蔗糖、葡萄糖引起的誤差。每一土樣需做無基質(zhì)對照。整個實驗需作無土壤對照。3．結(jié)果計算蔗糖酶活性以24h后1g土壤葡萄糖的毫克數(shù)表示。葡萄糖（mg）=(a-b)×c式中a---從標準曲線查得的樣品（加了基質(zhì)）對應的葡萄糖濃度，mg/mL；b---從標準曲線查得的樣品對照組的葡萄糖濃度，mg/mL；c---換算成1g
5、土的系數(shù)。二、脲酶:靛酚比色法1.試劑配制（1）pH6.7檸檬酸鹽緩沖液1L：取184g檸檬酸溶于300mL蒸餾水中，另取147.5gKOH溶于水，再將兩種溶液合并，用1NNaOH將pH調(diào)至6.7，并用水稀至1L。（2）苯酚鈉溶液：稱取62.5g苯酚溶于少量乙醇中，加2mL甲醇和18.5mL丙酮，然后用乙醇稀釋至100mL(A液)，保存在冰箱中。稱取27gNaOH溶于100mL水中（B液），保存在冰箱中。使用前，取A、B兩液各20mL混合，并用蒸餾水稀釋至100mL備用。（3）次氯酸鈉溶液100mL：取10%的次氯酸鈉溶液9m
6、L，用水稀釋定容于100mL容量瓶中，即活性氯的濃度為0.9%，溶液穩(wěn)定。（4）10%尿素溶液500mL：取50g尿素，用水稀釋至500mL。4（1）甲苯。（2）氮的標準溶液1L：精確稱取0.4717g硫酸銨溶于水并稀釋至1L，則得含氮0.1mg/mL的標準液。再稀釋10倍得到N工作液。2.操作步驟（1）標準曲線繪制：分別取氮的工作液1、3、5、7、9、11、13mL于50mL比色管中，另取一管做空白對照。用蒸餾水加至20mL。再加4.0mL苯酚鈉溶液和3mL次氯酸鈉溶液，隨加隨搖勻。20min后顯色，定容。1h內(nèi)在分光光度計
7、上于波長578nm處進行比色。根據(jù)光密度值與溶液濃度繪制標準曲線。（2）土壤脲酶活性測定：稱5.00g土樣，置于50mL三角瓶中，加入1.0mL甲苯。15min后加10mL10%尿素液和20mLpH6.7檸檬酸鹽緩沖液。搖勻后在37℃恒溫箱中培養(yǎng)24h。到時取出，6000rpm離心10min。取3.0mL上清液（新鮮土樣所吸取的上清液體積為2.0mL；風干土及保存1個月的土樣所吸取的上清液體積為0.5mL）于50mL刻度試管中，然后按繪制標準曲線顯色方法進行比色測定。3.結(jié)果計算脲酶活性以24h后1g土壤中NH3—N的毫克數(shù)表
8、示。NH3—N（mg）=a×b式中a---從標準曲線查得的NH3—N濃度，mg/mL；b---換算成1g土的系數(shù)。三、蛋白酶：茚三酮比色法1.試劑配制（1）1%酪素溶液1000mL：取10g酪素，用1000mLpH7.4的0.2M磷酸鹽緩沖液稀釋定容至1L的容量瓶中。（2）0
