人乳頭瘤病毒hpv核酸檢測對比分析課件

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1、人乳頭瘤病毒(HPV)核酸檢測內(nèi)容HPV與宮頸癌宮頸癌檢測方法比較HPV核酸檢測方法學(xué)比較臨床使用宮頸癌婦科第二大癌癥每年約有20余萬婦女死于宮頸癌新發(fā)病:全球---50萬/年我國---13.2萬/年姓名：哈拉爾德·楚爾·豪森國籍：德國民族：日耳曼課題：發(fā)現(xiàn)人乳頭瘤病毒（HPV）引發(fā)宮頸癌成績：獲得2008年度諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎HaraldzurHausen宮頸癌什么是HPV？HumanPapillomavirus人乳頭瘤病毒雙鏈DNA無包膜病毒廣泛分布于高等脊椎動物定向感染皮膚及粘膜的復(fù)層鱗狀上皮HPV病毒

2、電鏡照片Circular逆轉(zhuǎn)錄區(qū)域包括控制病毒基因組復(fù)制的基因序列E6、E7為兩種致癌蛋白編碼，它們是高危型HPV導(dǎo)致細(xì)胞變性的主要原因E1、E2、E4和E5負(fù)責(zé)病毒復(fù)制L1、L2為兩種病毒外殼蛋白編碼在預(yù)防HPV的疫苗中使用了L1HPV的類型已經(jīng)鑒定的乳頭狀瘤病毒有200多種與人有關(guān)的約125種30-40種感染生殖道低危型：HPV6、11、42、43、44等中間型：HPV31、33、35、39、51、52、58、59、68高危型：HPV16、18、45、56等臨床最重要的型：6、11、16、18、31、33、

3、35、38型8個亞型HPV感染HPV感染的途徑和危險因素性傳播直接皮膚接觸母嬰傳播性行為混亂免疫抑制吸煙其他STD協(xié)同感染口服避孕藥HPV感染率與發(fā)病率HPV感染與宮頸癌發(fā)病率變化圖，IntJCancer1993,53:919HPV感染的不同階段宮頸癌的癌前病變(CIN)CIN=CervicalIntraepithelialNeoplasia宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變CIN宮頸不典型增生宮頸原位癌：宮頸上皮細(xì)胞發(fā)生癌變，但癌變未突破基底膜、間質(zhì)無浸潤。輕度（CINⅠ級）：病變局限在上皮層的1／3內(nèi)中度（CINⅡ級）：病

4、變局限在上皮層的下2／3重度（CINⅢ級）：病變幾乎累及全部上皮層，僅剩1－2層表面的正常鱗狀上皮宮頸上皮細(xì)胞部分或大部分被不同程度異型細(xì)胞所替代定義宮頸癌的癌前病變(CIN)專家共識宮頸癌的“元兇”就是高危型HPV感染高危型HPV感染是宮頸癌的必要條件沒有HPV感染，就沒有宮頸癌防治HPV感染，就是防治宮頸癌1995年，國際癌癥研究協(xié)會認(rèn)為高危固定價HPV的持續(xù)性感染是宮頸癌的主要病因?qū)m頸癌感染HPV病毒?CIN?早期浸潤癌唯一知道病因的癌癥唯一可以通過早期干預(yù)阻斷的癌癥5-15年內(nèi)容HPV與宮頸癌宮頸癌檢測

5、方法比較HPV核酸檢測方法學(xué)比較臨床使用分子水平細(xì)胞水平組織水平宮頸癌檢測方法學(xué)發(fā)展過程1982年醋酸、碘液肉眼檢測靈敏度為70.9%特異度為74.3%1996年新柏氏TCT靈敏度為80.8%特異度為51-60%2000年HPV核酸檢測靈敏度為98.6%特異度為99%巴氏涂片靈敏度為50%以下特異度為？%1941年宮頸癌篩查發(fā)展史組織學(xué)檢測肉眼觀察陰道鏡觀察組織檢查優(yōu)點(diǎn)：操作簡單，價格低廉，適宜作初步篩查；缺點(diǎn)：準(zhǔn)確率低，人員素質(zhì)要求高，病人痛苦程度大。細(xì)胞學(xué)檢測傳統(tǒng)巴氏涂片液基細(xì)胞學(xué)傳統(tǒng)巴氏涂片（CV）液基薄

6、層細(xì)胞學(xué)技術(shù)(TCT)自動細(xì)胞學(xué)檢測系統(tǒng)（LCT）計(jì)算機(jī)輔助細(xì)胞檢測系統(tǒng)（CCT）細(xì)胞學(xué)檢測的假陰性液基細(xì)胞學(xué)檢測假陰性結(jié)果高達(dá)20%水平差的地方更高原因分析：1、視野局限2、人為因素1）取標(biāo)本、片子制備2）技術(shù)差異3）耐心、責(zé)任心細(xì)胞學(xué)檢測的假陽性1、凹空細(xì)胞是HPV感染的主要形態(tài)學(xué)改變，但不是特異性改變2、HPV正在清除階段細(xì)胞學(xué)檢測的性價比低TCT陰性要求每年做同樣的檢查HPV陰性可以把篩查時間延長到3-5年HPV檢測TCT檢查衛(wèi)生部《宮頸癌篩查及早診早治指南》核酸檢測直接檢查導(dǎo)致宮頸癌的元兇---HPV

7、病毒靈敏度高，特異性好操作簡便，可作為療效評估和監(jiān)測指標(biāo)宮頸癌篩查三方案最佳方案：HPV核酸檢測+液基細(xì)胞基本方案：醋酸白實(shí)驗(yàn)一般方案：HPV核酸檢測+傳統(tǒng)巴氏涂片中國癌癥研究協(xié)會推薦方法內(nèi)容HPV與宮頸癌宮頸癌檢測方法比較HPV核酸檢測方法學(xué)比較臨床使用HPV第一代核酸檢測產(chǎn)品產(chǎn)品：HC2、港龍13型原理：雜交捕獲技術(shù)特點(diǎn)：檢測核酸、不分型、不能科學(xué)定量、檢測時間長計(jì)算機(jī)判讀15minDNA-RNA雜交60min抗體捕獲60min化學(xué)發(fā)光檢測30minDNA分解45minHPV核酸第二代檢測產(chǎn)品產(chǎn)品：凱普21

8、型、亞能23型、透景26型、達(dá)安19型、港龍29型原理：膜條雜交、液相雜交特點(diǎn)：可以分型，而且高低危都能做需要雜交、時間長。5-10個小時不等。開放式雜交、極易導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)室生物污染。結(jié)果需肉眼判讀，增加人為誤差。不能定量HPV核酸第三代檢測方法產(chǎn)品：上海之江13型分型檢測試劑原理：分別采用HPV13種型別的特異性引物及熒光探針，應(yīng)用PCR+Taqman技術(shù)，對HPV13種型的特異性核酸片