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《土壤中產(chǎn)淀粉酶的芽孢桿菌的篩選及淀粉酶活力的測(cè)定資料要點(diǎn)》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫(kù)。
1、土壤中產(chǎn)淀粉酶的芽孢桿菌的篩選及淀粉酶活力的測(cè)定13級(jí)生技426摘要本實(shí)驗(yàn)從土壤中分離出能產(chǎn)淀粉酶的芽孢桿菌并對(duì)其進(jìn)行鑒定、保存，實(shí)驗(yàn)中涉及菌株的分離純化、菌株的形態(tài)學(xué)鑒定和生理生化鑒定，根據(jù)伯杰氏細(xì)菌學(xué)手冊(cè)鑒定其種屬。實(shí)驗(yàn)中通過(guò)80℃水浴20min預(yù)處理，殺死無(wú)芽孢菌體，篩選出芽孢桿菌；再用稀釋涂布平板法對(duì)芽孢桿菌進(jìn)行初步篩選；又通過(guò)分區(qū)劃線法對(duì)初篩菌株進(jìn)一步分離純化；最后用選擇性淀粉培養(yǎng)基進(jìn)行篩選，得到純培養(yǎng)的產(chǎn)淀粉的芽孢桿菌。最后并通過(guò)耐鹽試驗(yàn)、明膠試驗(yàn)、糖發(fā)酵試驗(yàn)、VP試驗(yàn)、吲哚試驗(yàn)等多項(xiàng)生理生化實(shí)驗(yàn)對(duì)篩選出來(lái)的菌種進(jìn)行鑒定。關(guān)鍵詞：淀粉酶芽孢桿菌
2、生化鑒定一、引言芽孢桿菌屬(Bacillus)是一類(lèi)好氧或兼性厭氧，產(chǎn)生抗逆性內(nèi)生孢子的桿狀細(xì)菌。多為腐生菌，主要分布于土壤、動(dòng)植物體表及水體中。由于芽孢桿菌屬的細(xì)菌可以產(chǎn)生多種有用代謝產(chǎn)物，芽孢又是菌體度過(guò)不良環(huán)境的休眠體。因此，在工、農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上有較高的應(yīng)用價(jià)值。菌體桿狀，直或接近直，0.3–2.2X1.2–7.0微米。多數(shù)運(yùn)動(dòng)，鞭毛典型側(cè)生，形成抗熱內(nèi)生孢子。在一個(gè)孢子囊細(xì)胞中，孢子不多于1個(gè)。暴露與空氣中時(shí)，不妨礙孢子的形成。革蘭氏反應(yīng)為陽(yáng)性，僅在生長(zhǎng)早期為陽(yáng)性、陰性。有機(jī)體化能營(yíng)養(yǎng)，利用多種底物進(jìn)行嚴(yán)格呼吸代謝，嚴(yán)格發(fā)酵代謝或呼吸和發(fā)酵二者兼有的代
3、謝。在呼吸代謝中，最終的電子受體是分子氧，在一些種中可以用硝酸鹽代替氧，大多數(shù)種產(chǎn)接觸酶，嚴(yán)格好養(yǎng)或兼性厭氧。淀粉酶是一種用途極為廣泛的生物催化劑，可應(yīng)用于面包制造業(yè)淀、粉的糖化和液化、紡織品脫漿、造紙、清潔劑工業(yè)、化學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)的分析和制藥業(yè)等。淀粉酶家族包括α-淀粉酶，β-淀粉酶和葡萄糖淀粉酶。二、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?．了解微生物分離純化的原理及微生物分離純化常用方法和技術(shù)；2．掌握從土壤中篩選產(chǎn)淀粉酶菌株的原理及方法；3．掌握微生物的搖瓶培養(yǎng)方法及淀粉酶活力測(cè)定的原理及方法；4．培養(yǎng)學(xué)生自行設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)流程、綜合分析解決問(wèn)題及判斷實(shí)驗(yàn)結(jié)果的能力；5．對(duì)所學(xué)習(xí)過(guò)的微
4、生物實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行綜合技能訓(xùn)練；6．從不同環(huán)境土壤樣品中篩選出能產(chǎn)淀粉酶的芽孢桿菌，并分析比較各產(chǎn)淀粉酶菌株的產(chǎn)淀粉酶活力及總結(jié)各芽孢桿菌在土壤中的分布情況。三、實(shí)驗(yàn)原理1.淀粉水解試驗(yàn)細(xì)菌分泌到胞外的淀粉酶可以將淀粉水解成糊精、雙糖和單糖等，加入碘液后，不出現(xiàn)藍(lán)色反應(yīng)，菌落周?chē)释该魅Α?.VP試驗(yàn)?zāi)承┘?xì)菌在葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基中能分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸，丙酮酸縮合，脫羧成乙酰甲基甲醇，后者在強(qiáng)堿環(huán)境下，被空氣中氧氧化為二乙酰，二乙酰與蛋白胨中的胍基生成紅色化合物3.有些細(xì)菌如大腸埃希菌、變形桿菌、霍亂弧菌等能分解培養(yǎng)基中的色氨酸生成吲哚（靛基質(zhì)），經(jīng)與試劑
5、中的對(duì)二甲基氨基苯甲醛作用，生成玫瑰吲哚而呈紅色，是為吲哚試驗(yàn)陽(yáng)性。4．檸檬酸鹽利用試驗(yàn)有的細(xì)菌如產(chǎn)氣桿菌，能利用檸檬酸鈉為碳源，因此能在檸檬酸鹽培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，并分解檸檬酸鹽后產(chǎn)生碳酸鹽，使培養(yǎng)基變?yōu)閴A性。此時(shí)培養(yǎng)基中的溴麝香草酚藍(lán)指示劑由綠色變?yōu)樯钏{(lán)色。不能利用檸檬酸鹽為碳源的細(xì)菌，在該培養(yǎng)基上不生長(zhǎng)，培養(yǎng)基不變色。5.明膠液化試驗(yàn)有些細(xì)菌具有明膠酶（亦稱類(lèi)蛋白水解酶），能將明膠先水解為多肽，又進(jìn)一步水解為氨基酸，失去凝膠性質(zhì)而液化。6.耐鹽性試驗(yàn)?zāi)望}性指能耐受高濃度鹽類(lèi)環(huán)境而生長(zhǎng)發(fā)育的性質(zhì)。微生物耐鹽性試驗(yàn)則是檢測(cè)微生物的耐鹽性。7.糖發(fā)酵試驗(yàn)微生物具
6、有不同的利用各種碳源的能力，其原理在于不同微生物具有不同的酶系。絕大多數(shù)細(xì)菌都能利用糖類(lèi)作為碳源，但是它們?cè)诜纸馓穷?lèi)物質(zhì)的能力上有很大差異。有些細(xì)菌能分解某種糖產(chǎn)生有機(jī)酸（如乳酸、醋酸、丙酸等）和氣體（如氫氣、甲烷、二氧化碳等），有些細(xì)菌只產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。溴甲酚紫是一種酸堿指示劑，在中性時(shí)為紫色，堿性時(shí)為深紅色，而在酸性時(shí)呈現(xiàn)黃色。微生物在進(jìn)行碳源代謝時(shí)可以產(chǎn)生不同的代謝產(chǎn)物，有些產(chǎn)物為酸性物質(zhì)。酸性物質(zhì)的積累有時(shí)會(huì)超出培養(yǎng)基的緩沖范圍，導(dǎo)致ph下降，溴甲酚紫的顏色由紫色轉(zhuǎn)為黃色。在產(chǎn)酸過(guò)程中有時(shí)會(huì)伴隨氣體的產(chǎn)生，這可以在杜氏管中的氣泡反應(yīng)出來(lái)。若碳源代謝的終
7、產(chǎn)物為中性化合物，既無(wú)顏色變化也無(wú)氣體產(chǎn)生，表明此時(shí)的代謝較為復(fù)雜。8.酪素水解試驗(yàn)微生物酪素水解試驗(yàn)是以天然牛奶蛋白為原料，經(jīng)酶水解、脫色、脫鹽、噴霧干燥而成的產(chǎn)品，含有18種游離氨基酸，含氮和蛋白量均大于80%。氨基酸是合成蛋白質(zhì)的基礎(chǔ)，是人、動(dòng)植物、微生物最基本的營(yíng)養(yǎng)成分之一。人和微生物可通過(guò)蛋白質(zhì)間接獲取氨基酸，但需要胃酸和酶的水解，當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)被鹽酸水解成氨基酸組分時(shí)藥用級(jí)可作為能量合劑直接供給人們補(bǔ)充能量。9.運(yùn)動(dòng)性試驗(yàn)用接種針蘸取少量的菌種，沿半固體培養(yǎng)基中心向管底作直線穿刺，如某細(xì)菌具有鞭毛而能運(yùn)動(dòng)，則在穿刺線周?chē)軌蛏L(zhǎng)。10.硝酸鹽還原試驗(yàn)
8、有些細(xì)菌具有還原硝酸鹽的能力，可將硝酸鹽還原為亞硝酸鹽、氨或氮?dú)獾?/p>
