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《微生物綜合實(shí)驗(yàn)：土壤中產(chǎn)淀粉酶芽孢桿菌的篩選及其淀粉酶活力的測定》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、土壤中產(chǎn)淀粉酶芽孢桿菌的篩選及其淀粉酶活力的測定姓名：李青嶸班級：生工102學(xué)號：1014200044同組組員：黃得鳳同組組員：張旭霞摘要本實(shí)驗(yàn)通過90℃水浴20min預(yù)處理，殺死無芽孢菌體，再以弱選擇性淀粉培養(yǎng)基和稀釋涂布平板法對土壤中產(chǎn)淀粉酶芽孢桿菌進(jìn)行初步篩選，又通過分區(qū)劃線法對初篩菌株進(jìn)一步分離純化，得到兩株純培養(yǎng)的芽孢桿菌。并通過耐鹽試驗(yàn)、明膠試驗(yàn)、糖發(fā)酵試驗(yàn)、VP試驗(yàn)、吲哚試驗(yàn)，等多項(xiàng)生理生化實(shí)驗(yàn)對篩選出來的菌種進(jìn)行鑒定，鑒定結(jié)果均為蜂房芽孢桿菌。進(jìn)一步通過3，5-二硝基水楊酸顯色法對菌種的淀粉酶活力進(jìn)行鑒定，測定結(jié)果分
2、別為10.68MMU，12.64MMU。關(guān)鍵詞：淀粉酶，芽孢桿菌，酶活測定1.前言淀粉酶是催化淀粉水解的一類酶的總稱，廣泛存在于動物、植物和微生物中。目前淀粉酶廣泛應(yīng)用多種領(lǐng)域，在發(fā)酵工業(yè)中淀粉酶可用于淀粉原料的液化及糖化工藝；在食品工業(yè)中淀粉酶可用于面包焙烤，使其體積更大，顏色更好，顆粒更柔軟；在農(nóng)業(yè)中淀粉酶可作為飼料添加劑，降解飼料中淀粉營養(yǎng)成分以利于動物吸收利用；此外，淀粉酶在醫(yī)療衛(wèi)生、廢料處理、紡織印染等領(lǐng)域都有廣泛應(yīng)用。目前生產(chǎn)應(yīng)用的淀粉酶主要來源于微生物，并集中在幾種細(xì)菌和真菌中，尤其以芽孢桿菌所產(chǎn)的淀粉酶較多。其原因首
3、先芽孢桿菌屬(Bacillus)中能產(chǎn)生淀粉酶的菌種較多；其次，芽孢桿菌屬產(chǎn)的淀粉酶有較好的應(yīng)用價值，如凝結(jié)芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌、嗜熱芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌產(chǎn)的淀粉酶具有耐熱性；再次，芽孢桿菌應(yīng)用歷史悠久，廣泛用于飼料添加劑，其安全性有保證。本文主要從土壤中篩選產(chǎn)淀粉酶的芽孢桿菌，分離純化，并進(jìn)行酶活測定，從而獲得有經(jīng)濟(jì)價值比較高的菌株。2.材料與方法2.1.實(shí)驗(yàn)材料1.1.1.土樣的采集從廣州大學(xué)B-8門前采集土樣？g，每天加入2g淀粉和10ml水進(jìn)行培養(yǎng)5天。1.1.2.培養(yǎng)基1.1.2.1.篩選及活化培養(yǎng)基[1]淀粉20g，
4、蛋白胨10g，NaCl2.5g，瓊脂10g，自來水1000ml,pH自然。1.1.2.2.斜面種子培養(yǎng)基[2]牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCl5g，瓊脂15～20g，自來水1000ml，pH7.2～7.4；1.1.2.3.搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)基[3]稱取可溶性淀粉2g，蛋白胨1g，牛肉膏0．3g，氯化鈉0．5g溶于100mL蒸餾水中。pH自然；1.1.2.4.蛋白胨液體培養(yǎng)基（作吲哚實(shí)驗(yàn)用）[2]蛋白胨10g，NaCl5g，自來水1000ml，pH7.2～7.4，121℃滅菌20min；1.1.2.5.葡萄糖蛋白胨培養(yǎng)基（VP和MR試驗(yàn)用
5、）[2]蛋白胨5g，葡萄糖5g，NaCl5g，自來水1000ml，pH7.2～7.4，121℃滅菌20min；1.1.2.6.糖發(fā)酵培養(yǎng)基（作細(xì)菌糖發(fā)酵試驗(yàn)用）[2]蛋白胨2g，NaCl5g，K2HPO40.2g，1%溴麝香草酚藍(lán)水溶液3ml，待試糖10g(一般糖或醇按1%量加入，而半乳糖、乳糖按1.5%的量加入)，自來水1000ml，pH7.2～7.4；1.1.2.7.酪氨酸平板（作酪氨酸水解試驗(yàn)用）L－酪氨酸0.5g懸浮于10mL蒸餾水中，20分鐘滅菌，然后于100mL無菌的營養(yǎng)瓊脂混合，即成酪氨酸水解平板；1.1.1.1.酪素
6、平板（作酪素水解試驗(yàn)用）取5g脫脂奶粉加入50mL蒸餾水中（或用50mL脫脂牛奶），另稱1.5g瓊脂溶于50mL蒸餾水中，將兩液分開滅菌。待冷至45－50℃時，將兩液混勻倒平板，即成牛奶平板；1.1.1.2.西蒙斯氏檸檬酸鹽培養(yǎng)液（作檸檬酸鹽利用試驗(yàn)用）[2]檸檬酸鈉2g，NaCl5g，MgSO4·7H200.2g,K2HPO4·3H201g,(NH4)2HPO41g,1%溴麝香草酚藍(lán)水溶液10ml，瓊脂15～20g，自來水1000ml，pH7.0,121℃滅菌20min；1.1.1.3.淀粉牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基[2]可溶性淀粉2
7、g，牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCl5g，瓊脂15～20g，蒸餾水1000mL，pH7.2～7.4；1.1.1.4.（2%、5%、7%）高鹽培養(yǎng)基[2]牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCl（2g、5g、7g），瓊脂15～20g，蒸餾水1000mL，pH7.2～7.4；1.1.1.5.明膠培養(yǎng)基牛肉膏3g，蛋白胨10g，明膠12g，蒸餾水1000mL，pH7.0；1.1.1.6.半固體培養(yǎng)基（作運(yùn)動性實(shí)驗(yàn)用）瓊脂含量0.5%，其他組分比例按牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基配制；1.1.2.試劑和儀器1.1.2.1.碘原液：碘1lg，碘化鉀22g，加
8、水定容至50OmL；1.1.1.1.單染色：草酸銨結(jié)晶紫或石炭酸復(fù)紅；1.1.1.2.革蘭氏染色：草酸銨結(jié)晶紫染色液，盧戈氏碘液，95%乙醇，0.5%沙黃染色液。1.1.1.3.芽孢染色：5%孔雀綠染色液，0.5%沙黃染色液。1.1.
