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1、ELISA法與金標(biāo)層析法檢測(cè)HIV抗體的適用性探討【摘要】目的將金標(biāo)層析法與ELISA法檢測(cè)HIV-Ab的結(jié)果進(jìn)行分析比對(duì)，以探討兩種方法檢測(cè)HIV抗體在日常工作中的適用性。方法對(duì)1208例血液樣本用金標(biāo)層析法與ELISA法檢測(cè)其HIV抗體。結(jié)果兩種方法檢測(cè)HIV抗體的結(jié)果差異無顯著性，ELISA法的特異性高于金標(biāo)層析法。結(jié)論兩種方法均可適用于醫(yī)學(xué)檢測(cè)，金標(biāo)層析法適合于急診、流動(dòng)采血點(diǎn)、基層單位的推廣使用，而ELISA法適合于大中型醫(yī)院HIV抗體篩查和艾滋病流行病學(xué)監(jiān)測(cè)等。【關(guān)鍵詞】HIV抗體；金標(biāo)層析法；ELISA法；適用性目前，檢測(cè)HIV抗體常用的初篩方
2、法有金標(biāo)層析法和ELISA法。由于ELISA法實(shí)驗(yàn)時(shí)間較長(zhǎng)，對(duì)設(shè)備、工作環(huán)境、實(shí)驗(yàn)人員素質(zhì)要求相對(duì)較高，因此中、小型以及偏遠(yuǎn)地區(qū)的實(shí)驗(yàn)室難以全面開展，而金標(biāo)層析法具有操作簡(jiǎn)單、快速等優(yōu)點(diǎn)已被很多醫(yī)療單位用來進(jìn)行HIV抗體初篩。但筆者在工作中發(fā)現(xiàn)，由于HIV抗體初篩結(jié)果與確認(rèn)結(jié)果不符而引發(fā)的醫(yī)療糾紛時(shí)有發(fā)生，因此根據(jù)不同的醫(yī)療環(huán)境和單位選擇合適的檢測(cè)方法十分重要。本文對(duì)用兩種方法檢測(cè)HIV抗體初篩陽性的結(jié)果與確認(rèn)結(jié)果進(jìn)行分析比較，旨在探討金標(biāo)層析法與ELISA法檢測(cè)HIV抗體在實(shí)際工作中的適用性，為合理選擇實(shí)驗(yàn)方法提供理論基礎(chǔ)。1資料與方法1.1一般資料所有血
3、液樣本均來自醫(yī)院2005年門診和住院病人，共1208例，其中男648例，女560例，年齡0.5～90歲，平均39歲。用ELISA法和金標(biāo)層析法同時(shí)檢測(cè)其HIV抗體，所有樣本均在采樣后4h內(nèi)檢測(cè)完畢。1.2方法1.2.1金標(biāo)層析法采用雙抗原夾心法原理，10～30min內(nèi)觀察結(jié)果。1.2.2ELISA法利用雙抗原夾心法，操作步驟嚴(yán)格按試劑盒說明書進(jìn)行。1.3試劑兩種方法均使用廈門新創(chuàng)公司生產(chǎn)的試劑，該試劑經(jīng)國家藥檢所批，批檢合格，且都在有效期內(nèi)（ELISA法試劑批號(hào)分別為：2005036601、2005056602、2004126608，金標(biāo)層析法試劑批號(hào)分別為
4、：2005040304、2005052501、2005011905）。1.4儀器洗板機(jī)Anth.sFludo；酶標(biāo)儀Anth.s2010。1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)分析檢測(cè)結(jié)果采用χ32檢驗(yàn)進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，以P<0.05為差異有顯著性?！ ?結(jié)果兩種方法檢測(cè)結(jié)果見表1。表1金標(biāo)層析法與ELISA法檢測(cè)結(jié)果比較（略）注：*ELISA法初篩陽性的7例標(biāo)本包含于金標(biāo)層析法11例初篩陽性標(biāo)本中。ELISA法與金標(biāo)層析法檢測(cè)HIV抗體的結(jié)果經(jīng)統(tǒng)計(jì)顯示差異無顯著性（χ2=0.65；P>0.05）3討論自1985年我國報(bào)道第一例艾滋病以來［1］，艾滋病在我國的流行趨勢(shì)日趨嚴(yán)峻
5、，近幾年更是進(jìn)入一個(gè)快速增長(zhǎng)期［2］。到目前為止，艾滋病尚無有效的治療措施，因此，對(duì)可疑人群的篩查顯得尤為重要。近年，艾滋病的檢測(cè)手段被不斷更新和利用。自20世紀(jì)70年代，F(xiàn)anlk等建立了ELISA技術(shù)后［3］，該技術(shù)便廣泛用于臨床免疫檢測(cè)。用于檢測(cè)艾滋病的ELISA法第三代試劑，采取雙抗原夾心法原理，利用酶催化底物反應(yīng)的放大作用［3］，用來提高特異性抗原抗體反應(yīng)的敏感性。其特點(diǎn)為特異性和靈敏度高、準(zhǔn)確性好。而金標(biāo)層析法是繼ELISA法之后發(fā)展起來的一種膜固相免疫測(cè)定，其以膠體金作為標(biāo)記物，利用層析作用來檢測(cè)抗原或抗體［4］。用于檢測(cè)HIV抗體金標(biāo)層析法現(xiàn)
6、在已廣泛使用于臨床和各醫(yī)療機(jī)構(gòu)。該方法操作簡(jiǎn)便、快速，無需特殊設(shè)備，從本文表1中看出，兩種方法均有較高的靈敏度，金標(biāo)法陽性的11例標(biāo)本用ELISA法檢測(cè)有4份標(biāo)本陰性、7份標(biāo)本陽性，但兩者差異無顯著性（P>0.05），均可適用于醫(yī)學(xué)檢測(cè)。然而筆者在工作中發(fā)現(xiàn)，選用HIV抗體初篩試劑時(shí)，應(yīng)視不同情況而定。本文表1中，11例金標(biāo)法初篩陽性的樣本，經(jīng)省CDC確認(rèn)7例為陽性，7例ELISA法檢測(cè)陽性的樣本經(jīng)省CDC確認(rèn)均為陽性?？梢姡珽LISA法的特異性高于金標(biāo)層析法，有較高的陽性預(yù)期值。而金標(biāo)層析法存在較高的假陽性率，其產(chǎn)生的原因多數(shù)還不清楚，排除技術(shù)因素外
7、，可能主要是因?yàn)榻饦?biāo)法受實(shí)驗(yàn)條件和時(shí)間的限制，與ELISA試劑在制作技術(shù)上還存在一定的差異，還有一些針對(duì)HLA抗原的抗體、患者自身免疫性疾病、寄生蟲、其他病毒以及高丙種球蛋白癥病人的血清標(biāo)本也常容易出現(xiàn)假陽性反應(yīng)［1］。3在醫(yī)院就診的過程中，因HIV-Ab初篩陽性而確認(rèn)實(shí)驗(yàn)陰性導(dǎo)致的醫(yī)療糾紛時(shí)有發(fā)生。因患者不理解或醫(yī)患之間溝通不夠，勢(shì)必給醫(yī)院的醫(yī)療服務(wù)質(zhì)量和醫(yī)療形象造成負(fù)面影響，也給受檢者造成巨大的精神壓力和恐慌心理。因此選用一種特異性高、有較高的陽性預(yù)期感、能最大限度保證發(fā)現(xiàn)真正HIV感染者的試劑尤為重要，ELISA試劑即具有以上優(yōu)點(diǎn)。所以大、中型醫(yī)院在進(jìn)
8、行HIV-Ab初篩時(shí)，除急需手術(shù)或輸血的病人用金標(biāo)層
