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1、丙型肝炎病毒檢測方法的研究進(jìn)展及其臨床意義????吳曉東,中國科學(xué)院研究生院北京市100039????首都醫(yī)學(xué)發(fā)展科研基金資助項目,No.2002-3068????首都醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)臨床合作基金資助項目,No.02JL20????通訊作者:謝立,100054,北京市,首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京佑安醫(yī)院,中國科學(xué)院研究生院.xl811cn@163.com????電話:010-63292211-2276????收稿日期:2005-01-29接受日期:2005-03-03????摘要????丙型肝炎病毒(HCV)為嗜肝性慢性病毒.HCV感染后，患者
2、的起病和臨床癥狀極不典型，以亞臨床感染為多見，容易造成漏診.HCV感染的慢性化發(fā)生率明顯高于乙型肝炎，較乙型肝炎易早期出現(xiàn)肝硬化、肝癌，死亡率較高.因此HCV的檢測對丙型肝炎病毒感染的早期診斷和指導(dǎo)臨床治療有重大的意義.目前用于HCV感染診斷的兩項主要指標(biāo)為抗-HCV和HCVRNA，現(xiàn)多采用的第三代檢測抗-HCVEIA試劑增加了HCV基因組NS5區(qū)表達(dá)的蛋白作為抗原，進(jìn)一步提高了試劑的敏感性，但還存在“窗口期”漏檢的問題.HCVRNA檢測靈敏度高、特異性強(qiáng)，具有早期診斷的意義，但檢出率較低，檢測復(fù)雜，也可出現(xiàn)假陽性.作為抗-HCV檢驗(yàn)
3、的補(bǔ)充試驗(yàn)，HCV核心抗原的檢測對處于HCV感染“窗口期”的個體檢測有很大價值.????謝立,吳曉東.丙型肝炎病毒檢測方法的研究進(jìn)展及其臨床意義.世界華人消化雜志2005;13(7):884-886????0引言????丙型肝炎病毒是單股正鏈RNA病毒.1991年，國際病毒命名委員會(ICTV)將其歸為黃病毒科丙型肝炎病毒屬[1]，其基因組含有一個大約9033個核苷酸構(gòu)成的大開放讀碼框(ORF)，可編碼3010-3033個氨基酸的多蛋白前體，多蛋白N端的1/4依次為核心蛋白(C)和包膜蛋白(E1和E2)等結(jié)構(gòu)蛋白，其余依次為NS2、N
4、S3、NS4和NS5等非結(jié)構(gòu)蛋白[2]，膜蛋白分布于病毒表面，NS3蛋白具有蛋白酶的功能，NS5蛋白為一依賴于RNA的RNA多聚酶.????與其他RNA病毒一樣，HCV基因組有很大的變異性，可能會引起其分子生物學(xué)行為、感染性、臨床致病性及對藥物治療的反應(yīng)等諸方面的不同[3-4].現(xiàn)已證實(shí)，90%非腸道傳播的非甲非乙型肝炎(NANBH)為HCV感染所致[1]，35-50%的非甲非乙型肝炎發(fā)展為慢性肝炎，與肝癌的發(fā)生相關(guān)[2].????自從1978年ShirachietlocatedintheTomb,DongShenJiabang,de
5、ferthenextdayfocusedontheassassination.Linping,Zhejiang,1ofwhichliquorwinemasters(WuzhensaidinformationisCarpenter),whogotAfewbayonets,duetomissedfatal,whennightcameal首先報道用雙向免疫擴(kuò)散法在輸血后肝炎患者急性期和恢復(fù)期血清中找到了丙型肝炎病毒特異性的抗原和抗體，而后不少學(xué)者利用放射免疫(RIA)和酶聯(lián)免疫(ELISA)等方法都曾找到了特異性的丙型肝炎病毒抗原和抗體[5
6、-6].1989年，Chooetal從大量有高度傳染性的黑猩猩血漿中提取核酸，經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄和分子克隆并進(jìn)行篩選，獲得了部分HCVcDNA序列，并表達(dá)重組抗原，建立了特異性抗-HCV血清學(xué)的檢測方法[7-8]，使丙型肝炎的研究成為近年來非?；钴S的研究領(lǐng)域，并取得了重大進(jìn)展.我們就HCV血清學(xué)檢測方法的研究進(jìn)展進(jìn)行了綜述.????1丙型肝炎病毒抗-HCV的檢測????隨著血液制品在世界范圍的流通，HCV感染呈世界性分布，為了控制丙型肝炎病毒的血液傳播，世界各國均開展了對獻(xiàn)血員抗-HCV的檢測.常用的抗-HCV診斷試劑采用間接酶聯(lián)免疫法(ELI
7、SA)，其基本原理是以HCV抗原包被酶標(biāo)板，用辣根過氧化物酶標(biāo)記的抗人IgG與被檢血清中的抗-HCV反應(yīng)，鄰苯二胺(OPD)或3，3’5，5’-四甲基聯(lián)苯胺(TMB)顯色后，根據(jù)顏色的深淺進(jìn)行陰陽性判斷.該方法中包被抗原的組成和質(zhì)量是關(guān)鍵因素.第一代抗-HCVELISA采用的抗原C100-3是HCV非結(jié)構(gòu)基因(NS3/NS4)和人超氧化物歧化酶基因嵌合后表達(dá)的融合蛋白，靈敏度低，漏檢率較高;第二代抗-HCVELISA在第一代基礎(chǔ)上增加了核心區(qū)重組蛋白C22和NS3區(qū)重組蛋白C33c，雖然在靈敏度和特異性上有很大改善，但仍不能排除由于重
8、組融合蛋白帶來的少數(shù)假陽性和極少數(shù)的漏檢[9].目前我國多采用第三代抗-HCVELISA試劑，其包被抗原為HCV核心抗原、NS3、NS4和NS5抗原，特異性超過99%，雖然目前缺乏判斷其敏感性的金標(biāo)準(zhǔn)，但對于免疫功能正常
