凋亡相關(guān)基因Survivin及Caspase3 mRNA在膀胱移行細(xì)胞癌中的表達(dá)及其意義.doc

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1、凋亡相關(guān)基因Survivin及Caspase3mRNA在膀胱移行細(xì)胞癌中的表達(dá)及其意義作者：管維，周四維，王勤章，葉章群【摘要】目的探討凋亡相關(guān)基因survivin及Caspase3mRNA的表達(dá)與膀胱移行細(xì)胞癌發(fā)生及發(fā)展的關(guān)系。方法應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RTPCR)檢測33例膀胱移行細(xì)胞癌組織中survivin和Caspase3mRNA表達(dá)的情況，結(jié)合臨床資料進(jìn)行分析。結(jié)果93.9%(31/33)的腫瘤組織可檢測到survivinmRNA表達(dá)，而對照組全部陰性表達(dá)，二者有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；81.8%(27/33)的腫瘤標(biāo)本可檢出Caspase3

2、mRNA，而對照組中檢出率為80%(8/10)，實(shí)驗(yàn)組與對照組間無明顯差異。在III級膀胱移行細(xì)胞癌中survivinmRNA的表達(dá)強(qiáng)度較I級為高，二者間有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。survivin和Caspase3的表達(dá)與腫瘤的臨床分期無關(guān)(P>0.05)。結(jié)論survivinmRNA在膀胱移行細(xì)胞癌中有特異性表達(dá)，其高表達(dá)提示腫瘤分化不良。阻斷suvivinmRNA的表達(dá)可能為膀胱腫瘤的治療提供新的途徑?！娟P(guān)鍵詞】膀胱癌　　近年來，通過腫瘤的基礎(chǔ)研究認(rèn)為凋亡的下調(diào)是腫瘤發(fā)生學(xué)中的中心事件。survivin是凋亡抑制基因家族的成員之一，在

3、多數(shù)人類常見惡性腫瘤中可觀察到survivin的過表達(dá)，可能與腫瘤細(xì)胞逃避凋亡以及有絲分裂的異常有關(guān)[14]。前期研究已經(jīng)探討了survivin蛋白在膀胱移行細(xì)胞癌中表達(dá)的情況，但是survivin表達(dá)的上調(diào)到底是在蛋白水平還是在RNA水平尚不清楚。Caspase3作為survivin的直接抑制對象，其mRNA水平在膀胱腫瘤中有無變化亦需進(jìn)一步研究。本實(shí)驗(yàn)采用了RTPCR方法對33例膀胱移行細(xì)胞癌患者的組織標(biāo)本進(jìn)行檢測，以評價(jià)survivin以及Caspase3mRNA的表達(dá)在膀胱移行細(xì)胞癌生物學(xué)行為中的地位和作用?！　?材料與方法　　1.1臨床資

4、料收集我院1999年1月至2003年3月33例膀胱癌患者手術(shù)的新鮮組織標(biāo)本，手術(shù)后病理證實(shí)均為膀胱移行細(xì)胞癌。其中男27例，女6例，年齡35-72歲(平均57.3歲)。另選擇10例癌旁正常膀胱黏膜作為陰性對照。膀胱癌按WHO病理分級標(biāo)準(zhǔn)：Ⅰ級11例，Ⅱ級16例，Ⅲ級6例；按UICCTNM標(biāo)準(zhǔn)分期：Ta-T1期13例，T2-T4期18例。所有標(biāo)本均凍存于-70℃?zhèn)溆?。　?.2實(shí)驗(yàn)方法采用RTPCR法。RNA提取試劑盒和DEPC為Gibco6BRL公司產(chǎn)品。逆轉(zhuǎn)錄試劑盒為Takara公司產(chǎn)品。無RNA酶水自制，另備氯仿、異丙醇、75%(體積分?jǐn)?shù))乙醇等。其

5、他試劑均為國產(chǎn)分析醇或進(jìn)口分裝。分子量標(biāo)記分別為DL2000(TaKaRa公司)和PCRladder。Survivin引物：5′GGACCACCGCATCTCTACAT(上游)；5′GCACTTTCTTCGCAGTTTCC(下游)，預(yù)擴(kuò)增片斷為338bp。Caspase3引物：5′CGTGTATTGTGTCCATGCTCAC(上游)；5′CCATCATTGACAGTTACTTGCTCC(下游)，預(yù)擴(kuò)增片斷為271bp；內(nèi)參GAPDH引物：5′GGGGAGCCAAAAGGGTCATCATCT(上游)；5′GAGGGGCCATCCACAGTCTTC

6、T(下游)，預(yù)擴(kuò)增片斷為235bp。Survivin及Caspase3引物經(jīng)primer軟件比對，符合要求。所有引物均由上海生物工程公司合成(5OD值)。實(shí)驗(yàn)步驟按說明書進(jìn)行。10g/L瓊脂糖凝膠電泳，拍照。用SQ9636型掃描系統(tǒng)掃描，HPIAS1000圖像分析系統(tǒng)檢測各組目的基因及GAPDH基因(內(nèi)參)的積分吸光度值，以二者的比值代表各組mRNA的表達(dá)量?！　?.3統(tǒng)計(jì)分析使用SPSS10.0軟件包統(tǒng)計(jì)分析，實(shí)驗(yàn)組與對照組的比較采用χ2檢驗(yàn)，各實(shí)驗(yàn)組相對平均表達(dá)水平間的比較采用方差分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義?！　?結(jié)果　　2.1S

7、urvivinmRNA在膀胱移行細(xì)胞癌中的表達(dá)本組共33例膀胱移行細(xì)胞癌標(biāo)本中，有31例survivinmRNA表達(dá)陽性，陽性率為93.9%(31/33)，而對照組全部表達(dá)陰性，兩者間有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，圖1)。以GAPDH作內(nèi)參進(jìn)行半定量分析后發(fā)現(xiàn)，survivinmRNA的表達(dá)強(qiáng)度在Ⅰ級和Ⅲ級膀胱移行細(xì)胞癌之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，但是與膀胱腫瘤的分期無明顯相關(guān)性(表1)。　　圖1survivinmRNA在膀胱移行細(xì)胞癌中的表達(dá)（略）　　表1Survivin及Caspase3mRNA在膀胱移行細(xì)胞癌中的表達(dá)（略）　　

8、*P<0.05vs.Ⅰ級　　2.2Caspase3mRNA