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《生化反應(yīng)與血清學(xué)鑒定》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫。
1、生化反應(yīng)與血清學(xué)實驗《醫(yī)學(xué)微生物學(xué)》實驗七一、生化反應(yīng)掌握細(xì)菌生化反應(yīng)的原理和臨床意義。熟悉鑒別細(xì)菌常用的生化試驗原理、方法和結(jié)果判斷。[實驗?zāi)康腯生化反應(yīng)基本原理不同的細(xì)菌含有不同的分解代謝的酶具有不同的分解代謝途徑對同一營養(yǎng)物質(zhì)的分解代謝及其產(chǎn)物有所不同利用生化方法檢測代謝產(chǎn)物以判斷細(xì)菌的分解代謝特征，從而達(dá)到鑒定細(xì)菌的目的。稱：細(xì)菌的生化反應(yīng)檢測法知識點常見的生化反應(yīng)對糖的發(fā)酵甲基紅試驗單糖發(fā)酵試驗VP試驗對蛋白質(zhì)的分解吲哚試驗硫化氫試驗枸櫞酸鹽利用試驗?zāi)蛩孛冈囼炂渌囼瀸嶒灢牧?.菌種大腸埃希菌、沙門氏菌2
2、.微量生化反應(yīng)管葡萄糖、乳糖、蔗糖、麥芽糖、甘露醇、蛋白胨水（靛基質(zhì)）、硫化氫。3.試劑吲哚試劑葡萄糖、乳糖、麥芽糖、甘露醇、蔗糖大腸埃希菌：分解乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣致病性腸道細(xì)菌：大多數(shù)不分解乳糖1.糖發(fā)酵試驗HCOOH脫氫酶CO2+H21.糖發(fā)酵試驗（1）原理細(xì)菌產(chǎn)生的酶酸糖（酸堿指示劑）氣體溴甲酚紫1.糖發(fā)酵試驗（2）方法37℃培養(yǎng)18～24h5種糖生化反應(yīng)管大腸埃希菌、沙門氏菌接種針穿刺接種觀察結(jié)果中性或堿性→紫色酸性→黃色1.糖發(fā)酵試驗（3）結(jié)果判斷溴甲酚紫＋－＋有細(xì)菌生長培養(yǎng)基呈混濁，可能出現(xiàn)3種結(jié)果。（3）結(jié)
3、果判斷2.靛基質(zhì)（吲哚）試驗色氨酸酶吲哚（無色）色氨酸吲哚試劑玫瑰吲哚（紅色）（1）原理（2）結(jié)果判斷陽性2.靛基質(zhì)（吲哚）試驗3.硫化氫試驗酶硫化氫含硫氨基酸硫化鐵黑褐色或硫化鉛（1）原理（2）結(jié)果判斷3.硫化氫試驗生化反應(yīng)材料分配分組兩人/組菌種沙門氏菌、大腸桿菌各一支生化反應(yīng)管七支/人二、血清學(xué)鑒定掌握細(xì)菌的血清學(xué)鑒定法。[實驗?zāi)康腯實驗原理根據(jù)抗原抗體反應(yīng)具有高度特異性的特點，用已知抗體來檢測未知抗原（細(xì)菌）。二、血清學(xué)鑒定實驗材料1.菌種待檢細(xì)菌2.試劑多價沙門菌O(A-F)診斷血清3.其他載玻片沙門氏菌
4、的主要抗原組成O抗原：至少58種,含相同抗原組分歸為一組，引起人類疾病的沙門菌大多數(shù)在A~F組。H抗原：分為Ⅰ、Ⅱ相，Ⅰ相以a、b、c等表示，Ⅱ相以1、2、3等表示。Vi抗原：抗原性弱，不穩(wěn)定，可阻止O抗原與其相應(yīng)抗體的凝集反應(yīng)。沙門氏菌診斷血清（11種）O2O4O7O9HaHbHcHdHiViA-F群多價OA-F群多價O先用A－F和Vi血清檢測，根據(jù)結(jié)果再進(jìn)行其他鑒定。注意：實驗方法50ul血清+待檢菌50ulNS+待檢菌結(jié)果判斷均勻混濁顆粒狀凝集物＋－群別菌型抗原oHA甲型副傷寒沙門菌1,2,12a:-B乙型副
5、傷寒沙門菌德比沙門菌鼠傷寒沙門菌1,4,5,121,4,121,4,5,12b:1,2f,g:-i:1,2C豬霍亂（或丙型副傷寒）沙門菌6,7,(Vi)c:1,5D傷寒沙門氏菌9,12,Vid:-E鴨沙門氏菌3,10e,h:1,6F阿伯丁沙門氏菌11i:1,2沙門氏菌屬國內(nèi)常見菌型診斷抗原表注意事項1.生理鹽水端應(yīng)不出現(xiàn)凝集顆粒。2.沙門菌Vi抗原存在時可阻止O抗原與相應(yīng)抗體發(fā)生凝集，故在做玻片凝集時應(yīng)加注意，需事先加熱破壞Vi抗原，O抗原才得以與相應(yīng)的O診斷血清發(fā)生凝集。血清學(xué)實驗進(jìn)程先鑒定A－F和Vi，根據(jù)結(jié)果
6、再進(jìn)行其他鑒定。A－FVi實驗進(jìn)程--為非沙門氏菌屬，不再繼續(xù)鑒定其他抗原成分。+-初步判斷為沙門氏菌屬，繼續(xù)鑒定其他抗原成分。-+初步判斷為沙門氏菌屬，但需去除菌體Vi莢膜后再繼續(xù)鑒定其他抗原成分。血清學(xué)實驗材料分配分組4人/組菌種待測菌種一支診斷血清1盒/組群別菌型抗原oHA甲型副傷寒沙門菌1,2,12a:-B乙型副傷寒沙門菌德比沙門菌鼠傷寒沙門菌1,4,5,121,4,121,4,5,12b:1,2f,g:-i:1,2C豬霍亂（或丙型副傷寒）沙門菌6,7,(Vi)c:1,5D傷寒沙門氏菌9,12,Vid:-E
7、鴨沙門氏菌3,10e,h:1,6F阿伯丁沙門氏菌11i:1,2沙門氏菌屬常見菌型診斷抗原表
