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1、IGF-Ⅱ基因在肝細(xì)胞癌組織中表達(dá)的研究【關(guān)鍵詞】IGF-Ⅱ基因 肝細(xì)胞癌 肝細(xì)胞癌(hepatocellularcarcinoma，HCC)是各種癌癥中惡性程度很高的一種癌瘤之一，本研究應(yīng)用半定量RT-PCR技術(shù)從mRNA水平檢測(cè)IGF-Ⅱ基因在肝癌、癌旁和正常組織中的表達(dá)情況，分析其在肝癌發(fā)生中的作用，探討肝癌的發(fā)生機(jī)制并探索可用于肝癌早期診斷及篩選的分子標(biāo)志物。1 材料與方法1.1 一般資料 病例為2002年12月～2003年12月青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院及青島市市立醫(yī)院肝膽外科手術(shù)患者。30例患者為HCC組，男22例，女8例，年齡33～71歲，平均52歲，術(shù)中取癌區(qū)、癌
2、旁區(qū)（距癌邊緣2～5cm）組織標(biāo)本，各30份。10例肝血管瘤手術(shù)患者為正常對(duì)照組，男11例，女5例，年齡35～59歲，平均52歲，術(shù)中取正常肝組織標(biāo)本。1.2 半定量RT-PCR?。?）組織單細(xì)胞制備；（2）Trizol法提取組織總RNA；（3）逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA：42℃1h，99℃5min,快速冷卻至4℃；（4）PCR檢測(cè)IGF-Ⅱ基因表達(dá)。甘油醛-3-磷酸脫氫酶（GAPDH）檢測(cè)逆轉(zhuǎn)錄效率并作為內(nèi)參照基因。1.3 PCR產(chǎn)物定量及分析 采用德國(guó)TanonGis-1000凝膠圖象分析系統(tǒng)，掃描并計(jì)算電泳條帶光密度值作為PCR產(chǎn)物的相對(duì)含量。用IGF-Ⅱ基因與GAPDH光密度的
3、比值代表IGF-Ⅱ基因的相對(duì)表達(dá)量。1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 SPSS10.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，采用χ2檢驗(yàn)法、方差分析及t檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2 結(jié)果 肝癌組、癌旁組和對(duì)照組IGF-ⅡExon4基因表達(dá)率分別為70.0%(21/30)、66.7%(20/30)和20.0%（22/30），IGF-ⅡExon4B基因表達(dá)率分別為:86.7%（26/30）、73.3%（22/30）和0。肝癌組和癌旁組比較：P均>0.05；肝癌組和對(duì)照組比較：P均<0.01；癌旁組和對(duì)照組比較：P均<0.053 討論 人正常IGF-Ⅱ基因?yàn)殚L(zhǎng)30×１０３的單拷
4、貝基因，位于11pl5，其轉(zhuǎn)錄與表達(dá)受4種不同啟動(dòng)子的調(diào)節(jié)（P1～P4），成人IGF-Ⅱ基因的表達(dá)主要受到肝組織特異的啟動(dòng)子P1的驅(qū)動(dòng)，表達(dá)水平很低［１］。2 近年研究發(fā)現(xiàn)，癌前病變狀態(tài)的肝組織及HCC組織中常有IGF-Ⅱ的異常表達(dá)［２］，而且IGF-Ⅱ可通過內(nèi)分泌作用及自分泌/旁分泌途徑促進(jìn)肝癌細(xì)胞的增殖與分化［３］，肝細(xì)胞在發(fā)生異常增殖和分化的某階段再次激活已關(guān)閉的P2、P3、P4啟動(dòng)子而產(chǎn)生胚胎表型的逆轉(zhuǎn)，導(dǎo)致類似胚胎樣細(xì)胞的表達(dá)，間接促進(jìn)HCC血管形成。本研究結(jié)果顯示IGF-Ⅱ基因在30例肝癌組織及對(duì)應(yīng)的癌旁組織中均呈高表達(dá)；在對(duì)照組正常肝組織中IGF-Ⅱ基因的表達(dá)水
5、平極低，IGF-Ⅱ基因的異常表達(dá)且呈漸增趨勢(shì)，提示IGF-Ⅱ基因在HCC中的高表達(dá)與其發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。 IGF-Ⅱ基因共有7個(gè)外顯子，其中P2控制Exon4及Exon5、6、7的轉(zhuǎn)錄，P3控制Exon4B及Exon5、6、7的轉(zhuǎn)錄，其區(qū)別在于Exon4和Exon4B的不同。通過半定量RT-PCR方法檢測(cè)Exon4和Exon4B的表達(dá)，可以反映P2和P3的活性。本研究結(jié)果提示：P2和P3的高活性可能導(dǎo)致了IGF-Ⅱ基因的過量表達(dá)。IGF-Ⅱ基因在肝癌組織中胚胎性逆轉(zhuǎn)表達(dá)可能存在多種啟動(dòng)子模式，最終的闡明還有待于更具體，更深層次的研究?！ GF-Ⅱ基因在癌前狀態(tài)及肝癌組織中呈
6、異常過量表達(dá)，可能是導(dǎo)致HCC發(fā)生發(fā)展的重要因素之一。IGF-Ⅱ基因檢測(cè)有可能成為肝癌早期診斷和篩選的手段之一?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】[１]KimKW,BaeSK,LeeOH,etal.InsulinlikegrowthfactorⅡinducedbyhypoxiamaycontributetoangiogenesisofhumanhepatocellularcarcinoma[J].CancerRes,1998,58(2):348-351.[2]SeoJH,KimKW,ParkBC.DifferentproteinbindingpatternintheP3promoterregiono
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