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1、胎盤多肽注射液對人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞增殖的影響【摘要】目的：研究胎盤多肽注射液對人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(ECV-304)增殖的影響。方法：采用細(xì)胞計數(shù)和MTT法觀察不同稀釋度胎盤多肽作用72h后，ECV-304細(xì)胞增殖情況。同時以免疫組織化學(xué)法檢測不同稀釋度胎盤多肽對ECV-304細(xì)胞增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)表達(dá)的影響。結(jié)果：一定稀釋度的胎盤多肽可促進(jìn)ECV-304細(xì)胞的增殖，25ml/L即可發(fā)揮作用，200ml/L作用最明顯。ECV-304細(xì)胞PCNA表達(dá)陽性率與胎盤多肽稀釋度呈劑量相關(guān)性。結(jié)論：胎盤多肽可促進(jìn)體外培養(yǎng)的ECV-304細(xì)胞增殖?！娟P(guān)鍵詞】胎盤；細(xì)胞計數(shù)；免疫組
2、織化學(xué)；胎盤多肽；內(nèi)皮細(xì)胞［Abstract］Objective:Toinvestigatetheeffectsofplacentapolypeptideontheproliferationofhumanumbilicalveinendothelialcell(ECV-304)invitro.Methods：ECV-304cellsweretreatedwithdifferentconcentrationsofplacentapolypeptide,andtheECV-304proliferationwasobservedwithcytometry,andMTTin72
3、h.Proliferatingcellnuclearantigen(PCNA)wasobservedwithimmunohistochemistrymethodatthesametime.Results：intherangeof25~400ml/L,placentapolypeptideshowedeffectonECV-304proliferationinvitroinadose-dependentmannerandthemaximaleffectshowedat200ml/L.PositivePCNAexpressionofECV-304correlatedwith
4、placentapolypeptideconcentrationsused.Conclusion：PlacentapolypeptidecouldpromotetheproliferationofECV-304invitro.［Keywords］placenta;cellcount;immunohistochemistry;placentspolypeptide;endothelialcell 近年來，隨著人們對胎盤研究的逐步深入，胎盤的加工從簡單的烘干與水煮發(fā)展到生物萃取，使人們對胎盤所含的生物活性物質(zhì)及其功能有了更深入的認(rèn)識［1］。2007年3~10月通過測定胎盤
5、多肽注射液對人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(ECV-304)增殖可能產(chǎn)生的影響，為進(jìn)一步研究利用胎盤多肽對血管內(nèi)皮進(jìn)行修復(fù)做初步的探討。1材料與方法1.1材料1.1.1胎盤多肽注射液貴州益康制藥有限公司惠贈。批準(zhǔn)文號：國藥準(zhǔn)字H20046260，4ml/支。31.1.2細(xì)胞株ECV-304購自中科院上海細(xì)胞生物學(xué)研究所。1.1.3主要試劑RPMI1640培養(yǎng)液（美國Gibco公司）；胎牛血清（杭州四季青公司）；MTT和二甲亞砜（國產(chǎn)分析純）。增殖細(xì)胞核抗原PCNA免疫組化試劑盒（北京博奧森生物技術(shù)有限公司）。1.1.4儀器二氧化碳培養(yǎng)箱（美國FORMA公司）、倒置相差顯微鏡（日本NI
6、KON公司）、酶聯(lián)免疫檢測儀（美國Bio-Rad公司)。1.2方法和步驟1.2.1藥物及細(xì)胞處理將胎盤多肽注射液用含0.4%胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液稀釋成下列稀釋度：200、100、50、25、12.5ml/L。4℃保存?zhèn)溆?。ECV-304培養(yǎng)至單層，細(xì)胞處于對數(shù)生長期備用。1.2.2細(xì)胞計數(shù)取對數(shù)生長期的ECV-304細(xì)胞，0.25%胰酶消化后,用含10%胎牛血清的RPMI1640制成細(xì)胞懸液，以8×104/ml接種于96孔板，每孔100μl。待細(xì)胞貼壁后換成含不同稀釋度胎盤多肽注射液的維持培養(yǎng)液（含0.4%胎牛血清）,并設(shè)對照，每個稀釋度做3個復(fù)孔。置于37
7、℃,5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。加藥后72h各劑量組做細(xì)胞計數(shù),重復(fù)實驗3次。1.2.3MTT比色法取對數(shù)生長期的ECV-304細(xì)胞，0.25%胰酶消化后,用含10%胎牛血清的RPMI1640制成細(xì)胞懸液，以8×104/ml接種于96孔板，每孔100μl。待細(xì)胞貼壁后換成含不同稀釋度胎盤多肽注射液的維持培養(yǎng)液,每個稀釋度3個復(fù)孔。培養(yǎng)72h后每孔加入10μlMTT(5ml/L),置37℃,5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)4h后,棄培養(yǎng)上清液,每孔加入100μlDMSO,振蕩器振蕩10min，酶聯(lián)免疫檢測儀進(jìn)行檢測，參比波長490nm，實驗重復(fù)3次。1.2.
