膽囊癌對化療藥物敏感性的研究

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1、膽囊癌對化療藥物敏感性的研究作者:周程,胡思安,龔昭,阮劍【摘要】目的研究化療藥物對膽囊細胞的敏感性。方法應用MTT法及流式細胞儀,選擇6種化療藥物作用于膽囊癌細胞株,進行化療藥物敏感性的檢測。結果MTT法及流式細胞法測定6種化療藥物對膽囊癌細胞的敏感性,由高至低依次為順鉑(DDP)±、絲裂霉素(MMC)±、卡鉑(CDB)±、阿霉素(ADM)±、甲氨蝶呤(MTX)±、長春新堿(VCR)±。結論種化療藥物以DDP、MMC較敏感,CDB、ADM、MTX次之,VCR最差?!娟P鍵詞】膽囊癌;化療;流式細胞儀【Abstract】ObjectiveTostudythesensitivityofthepr

2、imarygallbladdercarcinomatochemotherapeuticdrugs.MethodsAnalyzedbyMTTmethodsandcytofluorometry,thesensitivitydetectionofkindsofchemotherapeuticdrugstogallbladdercarcinomacellstrain.ResultsAllofthesixantitumordrugswasevaluatedbyMTTmethodsandcytofluorometry,theywere(fromhightolow):cisplatin(DDP)±,mit

3、omycinC(MMC)±,carboplatin(CDB)±,adriamycin(ADM)±,methotrexate(MTX)±,vincristine(VCR)±ConclusionDDPandMMCaremorechemosensitivethanCDB,ADMandMTXespeciallythanVCR.【Keywords】gallbladdercarcinoma;chemotherapy;cytofluorometry原發(fā)性膽囊癌是一種惡性程度高且預后較差的膽系惡性腫瘤,占消化系統(tǒng)惡性腫瘤的第五位,近年來的統(tǒng)計結果表明,其發(fā)病有增高趨勢[1]。雖然在診斷技術,及治療方法上有所

4、發(fā)展,但治療5年生存率僅有5%~10%的水平。手術治療仍然是目前膽囊癌治療的首選方法,但手術切除率低依然是困擾膽囊癌治療方法的主要原因,因此,藥物化療就顯得至關重要。但目前針對膽囊癌的化療效果欠佳,且國內外尚無統(tǒng)一、公認顯效的聯(lián)合用藥方案。我們選擇了5種化療藥物,采用MTT及流式細胞儀(FCM)方法檢測其藥物敏感性,以期找到臨床合理運用化療方案的科學依據(jù),從而使化療個體化。本實驗研究的結果報告如下。1材料與方法材料細胞來源膽囊癌細胞系(山東醫(yī)科大學外科陳博教授提供)。藥物順鉑、阿霉素、絲裂霉素、卡鉑、長春新堿、甲氨蝶呤。試劑及儀器RPMI1640培養(yǎng)基及小牛血清由北京中山公司提供,四甲基偶氮

5、唑鹽(MTT)及二甲基亞砜(DMSO)由Sigma公司提供,自動酶標讀數(shù)儀(國產DG-302),流式細胞儀FACScort(BectonDickinson)。方法膽囊癌細胞在含100%小牛血清的1640培養(yǎng)基,37℃,5%CO培養(yǎng)箱中生長。取對數(shù)生長期的細胞以每孔5×104個細胞接種于96孔細胞培養(yǎng)板中,37℃,5%CO2條件下培養(yǎng)48h。把所有細胞分為6個實驗組和1個對照組,6種不同濃度的化療藥物濃度為[藥物濃度計算公式為:藥物濃度(μg/ml)=60×D/5000÷50%×103,D為臨床用藥劑量(mg/kg·d),60為平均成人體重(kg),50%為紅細胞壓積,乘103后將mg換算成μ

6、g]DDP0μg/mg、MMCμg/ml、ADM0μg/ml、CDB00μg/ml、MTXμg/ml、VCR1μg/ml。分別加入6個實驗組中,使每孔最終體積為200μl,每個濃度設3個復孔。以無化療藥物的細胞液為空白對照,作用48h后,每孔加1mg/ml的MTT;繼續(xù)培養(yǎng)4h后加DMSO溶液,溫育30min;在自動酶標讀數(shù)儀上比色,波長570nm,測出每孔OD值(吸光度值),結果以高度敏感(抑制率>70%),中度敏感(抑制率0%~70%),不敏感(抑制率統(tǒng)計學方法采用SAS統(tǒng)計軟件進行Student-t檢驗。2結果MTT法測定化療藥物的平均抑制率不同的化療藥物對膽囊癌細胞的抑制率不同,體外

7、MTT的試驗表明,膽囊癌細胞對順鉑及絲裂霉素有較高的敏感性。見表1。表1MTT法測定化療藥物的平均抑制率注:*臨床上以抑制率大于50%為敏感流式細胞法測定化療藥物的殺傷率不同的化療藥物對膽囊癌細胞的殺傷率不同,流式細胞儀藥敏測法分析6種藥物之中,順鉑、絲裂霉素、阿霉素、卡鉑、甲氨蝶呤與對照組相比差異有非常顯著性;順鉑與絲裂霉素之間,以及阿霉素、卡鉑、甲氨蝶呤之間相比均差異無顯著性(P>);長春新堿與上述5種藥

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