西姆芽孢桿菌pq21防治煙草青枯病研究

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1、萬(wàn)方數(shù)據(jù)西姆芽孢桿菌PQ21防治煙草青枯病研究陳德鑫1，李晶2，王建斌2，陳太春2，馬志遠(yuǎn)2，林星華2，安德榮2(1．中國(guó)煙草總公司青州煙草研究所，青島266101；2．陜西省農(nóng)業(yè)分子生物學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，楊凌712100)摘要：本研究探討了新型微生物農(nóng)藥西姆芽孢桿茵PQ21對(duì)煙草青枯病的防治效果，在煙草中的定殖能力及最佳施用時(shí)間和施用次數(shù)。盆栽試驗(yàn)表明：西姆芽孢桿菌PQ2124h后接種病原茵，防治效果可達(dá)86．87％。定殖能力測(cè)定結(jié)果表明，西姆芽孢桿菌PQ21能在煙草各組織的表面及內(nèi)部定殖。根中的定殖量大于莖和葉。在接種后第10d定殖數(shù)量最大，

2、隨后下降。小區(qū)試驗(yàn)表明，西姆芽孢桿菌P(磁1(3OOOg／667mz)的防效最高，為84．78％。施用時(shí)間為苗期、移栽后lOd和移栽后30d聯(lián)合施藥的防治效果最好。關(guān)鍵詞：西姆芽孢桿菌；煙草青枯病；生物防治1引言煙草青枯病是由青枯雷爾氏菌(Ralstoniasolanacearum)引起的一種典型的微管束細(xì)菌性土傳病害，是一類(lèi)世界范圍的毀滅性病害。近年來(lái)，在中國(guó)由于連作煙田面積的擴(kuò)大及連作年限的增長(zhǎng)，不少地方煙草青枯病有加重流行的趨勢(shì)。目前青枯病的防治主要依靠土壤熏蒸[1]和化學(xué)藥劑。持續(xù)大量的化學(xué)藥劑使環(huán)境日益污染和病菌產(chǎn)生抗藥性，造成農(nóng)產(chǎn)

3、品有害物質(zhì)殘留超標(biāo)。因此，具有對(duì)環(huán)境、生態(tài)和人類(lèi)健康安全等優(yōu)點(diǎn)的微生物農(nóng)藥受到廣泛關(guān)注并發(fā)揮著越來(lái)越重要的作用[2]。芽孢桿菌是微生物殺菌劑的重要來(lái)源。對(duì)芽孢桿菌類(lèi)生防菌的篩選、鑒定和防治研究是國(guó)內(nèi)外研究的重點(diǎn)和熱點(diǎn)。目前已報(bào)道的對(duì)煙草青枯病有抑制作用的細(xì)菌菌株大都處于試驗(yàn)階段，進(jìn)入實(shí)際生產(chǎn)的很少。本實(shí)驗(yàn)室以從秦嶺原始森林土壤中分離到的一株新型高效抗菌型西姆芽孢桿菌(Bacillussiarnensis)PQ21為研究對(duì)象，旨在驗(yàn)證該菌株對(duì)煙草青枯病的盆栽和田間防治效果，探究其在煙草根、莖、葉內(nèi)部及表面的定殖情況，確定西姆芽孢桿菌PQ21的施

4、用時(shí)間和劑量，為青枯病的防治提供依據(jù)。2材料與方法2．1供試材料供試藥劑：西姆芽孢桿菌PQ21(10×1010cfu／g)可濕性粉劑，由西北農(nóng)林科技大學(xué)植保學(xué)院提供；25％青枯靈可濕性粉劑，浙江省溫州市鹿城植?；瘜W(xué)有限公司；98％棉隆微粒劑，南通施壯化工有限公司；農(nóng)用硫酸鏈霉素72％可濕性粉劑，華北制藥集團(tuán)。致病性煙草青枯病菌(Ralstoniasolanacearum)由西北農(nóng)林科技大學(xué)植保學(xué)院植病實(shí)驗(yàn)站保存并提供。煙草品種：K326。2．2試驗(yàn)方法2．2．1供試藥劑的用量和施用方法供試藥劑的用量和施用方法見(jiàn)表1。表1供試藥劑用量和施用方法

5、萬(wàn)方數(shù)據(jù)第三章煙草有害生物防治技術(shù)2．2．2對(duì)煙草青枯病的盆栽防效測(cè)定待煙苗長(zhǎng)到4～6片葉時(shí)開(kāi)始進(jìn)行盆栽防治試驗(yàn)，每個(gè)處理8株，重復(fù)3次。灌藥后24h傷根接病原菌，每株20mL，接菌濃度為5×108個(gè)／mL。24h后調(diào)查病情，計(jì)算病情指數(shù)和防治效果。試驗(yàn)分接種前24h施藥和接種后零星發(fā)病24h施藥進(jìn)行，以接病原菌作接菌對(duì)照，并設(shè)空白對(duì)照(不接病原菌)。2．2．3在煙草植株中的定殖動(dòng)態(tài)檢測(cè)定殖測(cè)定取煙田耕層土，經(jīng)高壓蒸汽滅菌后裝缽，每缽2．5kg。育苗后60d后PQ21灌根，移栽后1d、5d、10d、20d、40d、60d、80d、100d分別

6、采集煙株根系、莖稈、葉片檢測(cè)。用滅菌水沖凈表面，稍干后稱(chēng)取0．1--一1g待用，用70％乙醇浸3～5S，置于2％次氯酸鈉中消毒5～7min，將各處理組織置于4mL無(wú)菌水的研缽中充分研磨，靜置30min，稀釋后取適當(dāng)稀釋度的懸液0．1mL均勻涂布于含有3009／mL的Stre回收平板上，重復(fù)3次。以清水做對(duì)照處理。在37℃恒溫培養(yǎng)2～3d后計(jì)數(shù)，并換算成cfu／g。同時(shí)檢查清水對(duì)照中有無(wú)細(xì)菌菌落長(zhǎng)出[4]。2．2．4田間試驗(yàn)小區(qū)試驗(yàn)設(shè)在咸陽(yáng)市涇陽(yáng)縣煙草試驗(yàn)站示范田。選擇青枯病常年發(fā)生的旱煙田。種植密度1000株／667m2。設(shè)6個(gè)處理，每處理3

7、次重復(fù)，每重復(fù)30株，區(qū)組隨機(jī)排列。分2次施藥：第一次在移栽10d后，第二次在移栽后30d。田間管理同一般大田管理。2．2．5不同時(shí)期施藥對(duì)煙草青枯病防效試驗(yàn)試驗(yàn)條件如2．2．4所示。設(shè)8個(gè)處理：處理A苗期；B移栽后10d；C移栽后30d；D移栽后50d；E苗期+移栽后10d，F(xiàn)苗期+移栽后30d，G移栽后10d+移栽后30d；H苗期+移栽后10d+移栽后30d，對(duì)照(CK)按當(dāng)?shù)貎?yōu)質(zhì)煙生產(chǎn)技術(shù)進(jìn)行施肥和管理。2．2．6調(diào)查與數(shù)據(jù)分析按煙草行業(yè)CORESTA青枯病分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)‘5I，調(diào)查煙株發(fā)病率和病情指數(shù)，統(tǒng)計(jì)各個(gè)處理的防治效果。試驗(yàn)數(shù)據(jù)用DP

8、S統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行方差分析。病株率(％)一(發(fā)病株數(shù)／調(diào)查總株數(shù))×100病情指數(shù)一[∑(各級(jí)病株數(shù)×該病級(jí)值)]／(調(diào)查總株數(shù)×4)×100防治效果(％)一[對(duì)照