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《靶向xt1基因shrna真核表達質粒載體的構建及篩選》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在學術論文-天天文庫。
1、萬方數據靶向XT．1基因shRNA真核表達質粒載體的構建及篩選余資江1。余德立2(1貴陽醫(yī)學院，貴州貴陽550004；2貴陽中醫(yī)學院第二附屬醫(yī)院)[摘要]目的構建靶向木糖轉移酶-1(XT一1)的短發(fā)卡狀小干擾RNA(shRNA)質粒表達載體；為尋找脊髓損傷治療的新靶點提供工具。方法設計4個小分子短發(fā)卡狀RNA(siRNA)序列，體外合成DNA模板引物，與Pgenesil-l質粒構建成編碼shRNAR的表達載體，進行酶切和測序，再轉染體外培養(yǎng)的星形膠質細胞，篩選靶序列。結果構建的質粒表達載體完全符合設
2、計要求，轉染成功的細胞在熒光顯微鏡下顯示綠色熒光，G418可以篩選出陽性克隆。結論成功構建了編碼XT-1．shRNA的質粒表達載體；該載體為尋找脊髓損傷治療的新靶點奠定了基礎。[關鍵詞】硫酸軟骨素蛋白多糖；木糖轉移酶．1；小分子干擾RNA；短發(fā)卡狀RNA；質粒載體[中圖分類號]R322．81[文獻標識碼]A【文章編號]1002．266X(2009)03-0019-03EstablishandselectionofplasmidexpressivevectorcodingshRNAtargetingX
3、T-1YUZi-jian91．YUDe．1i(1CuiyangMedicalCollege，Cuiyang550004，只R．China)Abstract：ObjictiveToestablishandselecttheplasmidexpressivevectorcodingshorthairpinRiga(shRNA)tar-getingxylosyltransferase·1(XT-I)，inordertofindanewtherapeutictargetforthetreatmentofsp
4、inalcordinjury．Meth·odsFoursequencesofsmallinterferenceRNA(siRNA)weredesigned．DNAtemplateprimerofXT-1惴synthesizedinvitroandtheplasmidexpressivevectorscodingshRNAwereestabhshedwithpGenesil一1plasmid，thenwereidentifiedbydigestionandtestedforthesequence．Th
5、eastrocyeesweretransfeetedwithplasmidvictor，andthenweretakenfluores-cencephotographsandselectedbyG418．ResultsThedigestionidentificationofphsmidvectorsconfirmedthatDNAtern·plateprimerWtagsuceessfullyinsertedintheplasmidandthesequenceWaSinconformitywitht
6、hedesignedresult．Aftertheplasmidw=etorwithglx把nfluorescentproteinW88transfectedtothecells．itwasseen∞agreenfluorescentwave．Theposi-tirecloneswerealsosuccessfullyselected．ConclusionPlasmidexpressivevectorscedingXT-1shRNAcallbeSUCC@SS-fullyestablishedandc
7、apableofstabletransfeetion，andwhichprovidedanewtherapeuticfoundationforthetreatmentofspinalcordinjury．Keywords：ehondroitinsulphateproteoglycans；xylosyltransferase-1；8mallinterferenceRNA；shorthairpinRNA；plasmidexpressive脊髓損傷是常見的危重疾病，膠質瘢痕在脊髓損傷后形成并逐漸加劇，是抑
8、制脊髓修復的關鍵因素之一?。硫酸軟骨素蛋白多糖(CSPGs)是膠質瘢痕內重要抑制成分，由糖胺聚糖(GAG)鏈與不同核心蛋白共價結合形成，包括Phosphacan、Neuroean、brevican、NG2及aggrecan等【2J。脊髓損傷不同時期，膠質瘢痕內細胞成分及CSPGs水平不同最終構成膠質瘢痕的主要成分∞1。研究表明，木糖轉移酶(XT．1)是合成CSPGs中GAG的關鍵酶，GAG合成的起始步驟是在XT．1催化下，將一分子木糖基連接到核心蛋白多肽鏈的絲氨酸殘基
