藻藍(lán)蛋白的抗癌活性研究

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1、第!"卷第#期浙江大學(xué)學(xué)報’工學(xué)版(?*/@!"A*@#$%%&年&&月)*+,-./*012345.-67-583,95:;’<-65-33,5-6=>53->3(A*8@$%%&藻藍(lán)蛋白的抗癌活性研究J王勇&H錢峰&H錢凱先&H董強$’&K浙江大學(xué)生物技術(shù)系H浙江杭州!&%%$EL$K山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院H山東濟南$"%%#$(摘要B活細(xì)胞脫氫酶催化四唑鹽’MNN(還原H生成溶于有機溶劑的藍(lán)色甲月贊結(jié)晶H可定量反映細(xì)胞生長I流式細(xì)胞技術(shù)可根據(jù)細(xì)胞中OAP的質(zhì)量分?jǐn)?shù)來檢測其所處的細(xì)胞周期I采用上述兩種方法H研

2、究了藻藍(lán)蛋白’QR(對S3T.細(xì)胞的抗癌活性I實驗證明HQR對S3T.細(xì)胞生長有明顯的抑制作用H當(dāng)QR濃度為U%V6WT時對癌細(xì)胞的抑制率達(dá)!&K%XI初步認(rèn)為這種抑制機理為BQR使S3T.細(xì)胞由合成期’=(或分裂期’M(向Y&期轉(zhuǎn)變和積集H細(xì)胞OAP合成衰減I關(guān)鍵詞B螺旋藻L藻藍(lán)蛋白L四唑鹽L流式細(xì)胞技術(shù)L人子宮頸癌細(xì)胞’S3T.細(xì)胞(中圖分類號BZ&E文獻(xiàn)標(biāo)識碼BP文章編號B&%%UCDE![’$%%&(%#C%#E$C%F螺旋藻’95,+/5-.(的蛋白質(zhì)高達(dá)"%X]E%XH其中H藻藍(lán)蛋白’QR(占

3、總蛋白的EX左右IQR具有特征性的吸收光譜和熒光光譜是一種新穎的熒光分子探針^&H$_I隨著生物學(xué)‘醫(yī)學(xué)‘海洋藥物學(xué)等學(xué)科的發(fā)展HQR的生物活性已成為人們關(guān)注的熱點I飯島登等’&DU$(發(fā)現(xiàn)QR可提高淋巴細(xì)胞活性H增強機體抵抗力H繼而在&DU!年發(fā)現(xiàn)QR能維持和促進(jìn)正常受控細(xì)胞的功能H防止腫瘤的生長和復(fù)發(fā)I抗腫瘤藥物的體外篩選H通常有染料排除法H軟瓊脂克隆法和^!^!_S_胸腺嘧啶摻入法等I但這些方法準(zhǔn)確度較差H重復(fù)性低‘操作復(fù)雜H實驗周期長I本文采用MNN法^F_和流式細(xì)胞技術(shù)對QR的抗癌活性進(jìn)行了研究I

4、&材料與方法aKa實驗材料S3T.細(xì)胞株’人子宮頸癌細(xì)胞(H由浙江省腫瘤醫(yī)院提供IQR由浙江大學(xué)生物科學(xué)與技術(shù)系細(xì)胞實驗室純化制備IaKb主要試劑cQMd&#F%培養(yǎng)基’Y50>*R*(H胎牛血清’杭州四季青生物工程公司(H胰蛋白酶:,;95-’O50>*進(jìn)口分裝(HMNN’=56V.R*(H二甲基亞砜OM=e’M3,>fR*(HN,5:*-gC&%%’=56V.進(jìn)口分裝(HcA.93P’=56V.(HQd染料’=56V.(等IaKh溶液配制Qi=液B每升溶液含A.R/U@%%6‘fR/%@%$%6‘A.

5、$SQeFjS$e&@"#6‘kS$QeF%@!6H&"磅滅菌&"V5-IS.-f9液B每升溶液含A.R/&U@F%6‘fR/%@F%6‘R.R/$%@&F6‘M6=eFjES$e%K$6‘A.$SQeFjS$e%@%#6‘kS$QeF%@%#6HA.SRe!%@!"6H葡萄糖&K%%6H酚紅%@%$6HU磅滅菌$%V5-IOCS.-f9液B每升溶液含A.R/U@%%6‘fR/%@F%6‘A.$SQeFjS$e%@%#6‘A.SRe!%@!"6‘酚紅%K%$6HU磅滅菌$%V5-I收稿日期B$%%%C%#C

6、&$@基金項目B浙江省自然科學(xué)基金資助項目’!D#%ED(@作者簡介萬方數(shù)據(jù)B王勇’&D#FG(H女H四川人H副教授H從事細(xì)胞生物學(xué)和細(xì)胞工程研究I第Y期王勇9等,藻藍(lán)蛋白的抗癌活性研究YA]!"#$%&’()*!+液,!"#$%&’-*&./01,234546378)*!+462791444:;*(<=’>%液9用?=@<調(diào)$<至AB39超濾除菌CD!!液,用EFG深解成37H;9超濾除菌9IJ避免保存CKBL主要儀器M@2自動細(xì)胞培養(yǎng)箱-NOPD0QRS1A249T0":=M06UG+59酶標(biāo)儀-)V+

7、(119上海四達(dá)生物技術(shù)研究所59流式細(xì)胞儀-FR/W0’*&/>&’%0’M06UG+59細(xì)胞培養(yǎng)瓶-23:;59XY孔板92I孔板-華美公司5CKBZ

8、養(yǎng)2Ib后9更換新鮮培養(yǎng)液C其中I14組為實驗組9每組每孔分別加入144a;質(zhì)量濃度為248I48‘481Y4:7H;的EM液9使EM最終作用質(zhì)量濃度分別為148248I48‘4:7H;C另一組為空白對照組9每孔加144a;EFGC于]AJ培養(yǎng)A2b后9加入D!!液924a;H孔9]AJ溫育Ib9棄培養(yǎng)液9加入*DG@或無水乙醇-144a;H孔59輕微振蕩使甲月贊結(jié)晶充分溶解9用酶標(biāo)儀在IX4’:測定@*值9按下