紫甘薯hplc指紋圖譜建立及抗氧化活性研究

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1、西南大學(xué)碩士學(xué)位論文紫甘薯HPLC指紋圖譜建立及抗氧化活性研究姓名：諶金吾申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：微生物與生化藥學(xué)指導(dǎo)教師：陳敏20100601西南大學(xué)碩士學(xué)侍論文摘要紫甘薯HPLC指紋圖譜建立及抗氧化活性研究微生物與生化藥學(xué)專業(yè)諶金吾指導(dǎo)教師陳敏教授摘要本文以重慶現(xiàn)代甘薯工程中心選育的38個(gè)紫甘薯品種為研究對(duì)象，利用HPLC方法建立指紋圖譜。對(duì)該中心提供的33個(gè)紫甘薯的甲醇提取物進(jìn)行體外抗氧化活性試驗(yàn)，篩選出了活性相對(duì)較高的品種。對(duì)渝紫263的主要花青素組分進(jìn)行提取、分離和純化，并對(duì)分離得到純度較高的組分進(jìn)行結(jié)構(gòu)推測(cè)和體外抗氧化活性實(shí)驗(yàn)，篩選出活性較強(qiáng)的組分，純度較高的組分結(jié)構(gòu)在進(jìn)一步鑒

2、定中。1．采用HPLC法建立了紫甘薯色素指紋圖譜。以重慶現(xiàn)代甘薯研究中心選育的38個(gè)品種經(jīng)甲醇提取、過濾、AB一8大孔樹脂純化和乙酸乙酯萃取等純化工藝得到的花青素總提物為研究對(duì)象，以3％的甲酸化甲醇和重蒸水為流動(dòng)相梯度洗脫建立指紋圖譜。結(jié)果表明，不同品種的紫甘薯均含有14個(gè)共有峰。這14個(gè)共有峰是紫甘薯的共有特征峰，峰面積占峰總面積90％以上，這14個(gè)峰可以代表花青素的主要特征，具有紫甘薯特征花青素化學(xué)條碼的作用，可為紫甘薯新品種鑒定提供參考和依據(jù)。這也說明不同品種紫甘薯的特征花青素的峰種類基本上一致，差異集中在峰面積上，表明通過不同雜交方法得到的紫甘薯花青素變異性不顯著，這與控制花青素合

3、成基因不易發(fā)生突變的觀點(diǎn)相一致。2．對(duì)33個(gè)紫甘薯品種進(jìn)行了體外抗氧化活性測(cè)試。對(duì)重慶甘薯研究中心提供的33種紫甘薯鮮品洗凈、粉碎，以1％甲酸化甲醇為提取劑和1：20料液比隔夜提取，提取液經(jīng)過濾、離心后得33個(gè)供試品。以維生素c為對(duì)照對(duì)照，測(cè)定了33個(gè)供試品的總抗氧化能力、清除DPPH自由基、抗脂質(zhì)過氧化亞油酸體系以及清除羥基自由基的能力。同時(shí)以消光系數(shù)法測(cè)定33個(gè)供試品的色價(jià)以得到33種紫甘薯總花青素的相對(duì)含量，并對(duì)色價(jià)和抗氧化活性四個(gè)體系數(shù)據(jù)進(jìn)行相關(guān)分析和線性回歸。實(shí)驗(yàn)可知：①綜合4種體外抗氧化活性測(cè)試體系，篩選到渝紫43，6-24．50，渝紫263，8．13—28，6．15-6，6-

4、6—16等6個(gè)品種具有顯著的抗氧化活性。②花青素含量與總抗氧化能力、羥基自由基清除、DPPH清除為中度正相關(guān)，顯著水平為極顯著，24h以內(nèi)與亞油酸抗脂質(zhì)過氧化為弱相關(guān)。線性回歸顯示，回歸方程常數(shù)項(xiàng)過大，回歸統(tǒng)計(jì)意義不大；同時(shí)據(jù)色價(jià)推測(cè)33個(gè)供試品所用濃度的總花青素含量在(0．033-0．126)mg／ml范圍內(nèi)，而花青素含量在O．006mg／ml與0．1mg／ml的維生素C具有相近的抗氧化能力、清除DPPH自由基和羥基自由基的能力、脂質(zhì)過氧化亞油酸體系，因此可知33個(gè)紫甘薯均有明顯抗氧化活性。3．對(duì)“渝紫263”進(jìn)行了抗氧化活性組分研究。在體外抗氧化活性指導(dǎo)下，渝紫263樣品經(jīng)洗凈、粉碎后

5、用含0．1％鹽酸的95％I業(yè)酒精提取，提取物經(jīng)AB．8大孔樹脂柱，用酸化兩南大學(xué)碩士學(xué)何論文摘要水反復(fù)沖洗至流出液無色，然后分別以30％乙醇、50％乙醇和100％乙醇進(jìn)行洗脫得到3個(gè)部分。以HPLC和色價(jià)法對(duì)3個(gè)部分進(jìn)行分析檢測(cè)。將30％乙醇洗脫部分上反相硅膠柱，以1％的酸化甲醇．水行梯度洗脫，得到Frl—Frll共11個(gè)組分。對(duì)該11個(gè)組分分別進(jìn)行相對(duì)純度測(cè)定、所含化合物結(jié)構(gòu)推理和體外抗氧化活性試驗(yàn)。結(jié)果表明：Fr2、Fr3為花青素苷元，F(xiàn)rl、Fr4和Fr5為的花青素單糖苷，F(xiàn)r6和Frl0含有咖啡?；?，F(xiàn)rll含有香豆?；現(xiàn)r9為含有咖啡?；幕ㄇ嗨貑翁擒?，F(xiàn)r7為花青素雙糖苷，F(xiàn)

6、r8為含咖啡酰基的花青素雙糖苷?？偪寡趸^好的是Fr9、Frll、Frl0、Fr6和Fr2，其中Fr9、Frll高于維生素C對(duì)照，清除DPPH活性較高的組分為Fr8、Fr7、Fr9、Frl1和Frl0，清除羥基自由基活性較好的組分為Fr2、Fr9、Fr3、Fr4、Frl0、Fr7，11個(gè)部分均有較好的抗亞油酸過氧化體系作用。綜合分析，以Fr9、Frl0、Fr7和Fr2抗氧化活性最高。其所含具體花青素的分離和結(jié)構(gòu)鑒定有待進(jìn)一步研究。關(guān)鍵詞：紫甘薯花青素HPLC指紋圖譜抗氧化活性，活性組分Ⅱ西南大學(xué)碩士學(xué)位論文Abstract曼曼曼!曼曼曼鼉鼉詈曼量量量曼曼曼曼量曼皇璺量曼曼曼曼!曼I-__

7、．_．_．It曼曼曼曼曼曼曼曼曼EstablishmentofHPLCFingerprintofPurpleSweetPotatoandstudyonthecomponentsofAntioxidantActivityPostgraduateofMicrobialandBiochemicalPharmacyJinwuchertSupervisorProf．MinChenABSTRACTInthisarticle，wees