葛花對(duì)酒精性肝損傷保護(hù)作用的研究

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1、葛花對(duì)酒精性肝損傷保護(hù)作用的研究【摘要】　　目的研究葛花對(duì)急性酒精性肝損傷的作用機(jī)理。方法取昆明種小鼠40只，隨機(jī)分成兩組。對(duì)照組生理鹽水ml/10g灌胃，給藥組葛花水提液ml/10g灌胃，30min后均灌酒/10g，90，150min后每組各取小鼠10只眼眶采血測定血中乙醇濃度；取雄性昆明種小鼠30只，隨機(jī)分成空白對(duì)照組、模型對(duì)照組、給藥組，前二組生理鹽水ml/10g灌胃，后一組葛花水提液ml/10g灌胃，30min后前一組灌生理鹽水/10g，后兩組灌酒/10g，如此反復(fù)，連續(xù)d，第9天灌胃30min后處死小鼠，

2、用%預(yù)冷KCl制作肝勻漿液，測定肝中丙二醛的含量、谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶的活性。結(jié)果給藥組90，150min血中乙醇濃度均顯著低于對(duì)照組。給藥組MDA值較模型對(duì)照組明顯降低、GST值較模型對(duì)照組明顯升高。結(jié)論葛花水提液可通過促進(jìn)乙醇代謝，減少M(fèi)DA，增加GST而護(hù)肝?！娟P(guān)鍵詞】酒精性肝損傷　葛花　丙二醛　谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶急性酒精中毒又稱醉酒，是指一次飲酒過量而導(dǎo)致的中樞神經(jīng)系統(tǒng)、消化系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)、心腦血管系統(tǒng)等的損傷過程。當(dāng)前酒濫用(alcoholabuse)和酒依賴性(Alcoholism)已成當(dāng)今世界范圍內(nèi)最嚴(yán)重的社會(huì)

3、經(jīng)濟(jì)和公共衛(wèi)生問題之一［1］。中國傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)對(duì)酒早有認(rèn)識(shí)，李時(shí)珍在《本草綱目》中指出“酒，天之靈祿也，少飲則和血、行氣、壯神、御寒、消愁，痛飲則傷神、耗血、損胃、亡精、生痰、動(dòng)火”?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為脂質(zhì)過氧化反應(yīng)對(duì)酒精中毒所致肝損傷的形成和發(fā)展起著十分重要的作用［2］。本次實(shí)驗(yàn)觀察了葛花水提液對(duì)急性酒精中毒所致肝損傷的保護(hù)作用并對(duì)葛花水提液護(hù)肝的作用機(jī)理作了初步研究?！?材料與方法藥品與試劑葛花水提液(本實(shí)驗(yàn)室自配)；無水乙醇(天津市化學(xué)試劑有限公司)，批號(hào)：XX1118，密度；仲丁醇(天津化學(xué)試劑有限公司)，批號(hào)：XX

4、1129，密度；肝素鈉注射液(常州千紅制藥有限公司)，批號(hào)：XX0131。動(dòng)物及分組取小鼠40只，體質(zhì)量18～2g，實(shí)驗(yàn)前1h禁食不禁水隨機(jī)分成兩組，對(duì)照組和給藥組，每組20只，分別灌服生理鹽水/10g，葛花水提液/10g，30min后灌服56度白酒二倍稀釋液/10g，于酒后90，150min每組各取10只小鼠經(jīng)眼眶采血，放入EP管中(肝素抗凝)備測。取雄性昆明種小鼠30只，隨機(jī)分成3組?？瞻讓?duì)照組生理鹽水ml/10g灌胃，30min后給生理鹽水/10g；模型對(duì)照組生理鹽水ml/10g灌胃，30min后給酒/10g

5、；給藥組葛花水提液ml/10g灌胃，30min后給酒/10g，連續(xù)d，第9天給酒30min后處死小鼠，用%預(yù)冷KCl制作肝勻漿液，測定丙二醛的含量、谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶的活性。儀器上海天美GC－7890型檢測器，電恒溫加熱器，SHZ－88式水浴恒溫振蕩器，UV-1601雙光束紫外分光光度計(jì)，低溫高速離心機(jī)，－85℃超低溫冰箱，DY89－1型電動(dòng)玻璃勻漿機(jī)，250μl氣密型注射器。乙醇濃度的測定取仲丁醇標(biāo)液1ml和血樣放入頂空瓶中，用內(nèi)襯聚四氟乙烯膜的硅膠墊密封，置電熱恒溫器中60℃加熱30min，然后用250μl氣密型注

6、射器吸100μl進(jìn)樣，用氣相色譜法測定組分乙醇和內(nèi)標(biāo)物仲丁醇的色譜峰面積比(Ai/As)，根據(jù)公式Ci=.686×(Ai/As)×計(jì)算血中乙醇濃度［3］。MDA、GST含量的測定用雙光束紫外分光光度計(jì)用TBA比色法［4］測定MDA，參考Habig介紹的方法［5］，測定CDNB與GSH之間的非酶結(jié)合反應(yīng)。計(jì)算方法MDA含量=/=△OD×10-/　　D：每克肝重e：×10M-1cm-1　　肝GST活性計(jì)算方法GST(mmol·min-1·g-1)=×1000ε×肝蛋白量　　e：即克分子消光系數(shù)，為·mmol·g-1。統(tǒng)

7、計(jì)學(xué)處理結(jié)果均用t檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)。結(jié)果.1血中乙醇濃度的變化結(jié)果見表1。由表1可見，給藥組90，150min乙醇血藥濃度均小于對(duì)照組。表1復(fù)方解酒藥對(duì)小鼠乙醇濃度變化的影響.2小鼠肝中MDA、GST的變化結(jié)果見表2。表2葛花水提液對(duì)肝MDA含量和GST活性的影響與空白對(duì)照組比較，模型對(duì)照組MDA的量明顯增加、GST活性顯著降低，與模型對(duì)照組比較，給藥組MDA含量顯著降低，GST活性升高。討論　　生理狀態(tài)下乙醇在乙醇脫氫酶作用下產(chǎn)生乙醛，乙醛可繼續(xù)被氧化成乙酸。乙醇轉(zhuǎn)變成乙醛及乙醛轉(zhuǎn)變成乙酸鹽或乙酰輔酶A的過程中都可產(chǎn)生還

8、原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)，NADH穿梭于線粒體，NADH與NAD的比值增高，甚至可高達(dá)正常的2～3倍，使肝內(nèi)的氧化還原狀態(tài)發(fā)生改變。長期或大量飲酒可引起滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)增生以及誘發(fā)CYP2E1活性增高，從而導(dǎo)致肝細(xì)胞內(nèi)乙醛濃度的顯著增高，這可能是引起酒精性肝損傷的重要原因［6］。CYP2E1還能引起酒精性肝損傷的脂質(zhì)過氧化作用［7］，這也是引起酒精性肝