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1、白腐菌真菌漆酶對染料降解的研究：漆酶（E.C.1.10.3.2）是一類含銅的氧化還原酶，常被稱為對苯二酚的氧化酶。本文討論白腐菌產(chǎn)漆酶的過程，漆酶對靛藍和金橙Ⅱ在脫色氧化降解方面的研究，從實驗的數(shù)據(jù)我們得到：漆酶在氧化降解靛藍時最適合的pH=4.5，最佳溫度是30℃，用3.9IU/mL的漆酶來進行脫色降解反應(yīng)時，420min時脫色較完全，可以達90%；而漆酶氧化降解脫色金橙Ⅱ的適合的條件是pH=4.0，30℃，采用濃度為13.5IU/mL的漆酶處理含有金橙Ⅱ的溶液，反應(yīng)達500min時，脫色較完全，可以達到90%以上。
2、 關(guān)鍵詞：白腐菌；漆酶；靛藍；金橙Ⅱ；脫色降解 引言 漆酶（E.C.1.10.3.2）是一類含銅的氧化還原酶，利用氧把對苯二酚（也叫氫醌）氧化后能生成對苯醌，也常被稱為對苯二酚的氧化酶，一般存在于真菌和植物中[1][2]?！ ∮捎诮玖瞎I(yè)的快速發(fā)展，使得染料工業(yè)對環(huán)境的污染成為當前的重大課題[3]，而漆酶能在染料的降解方面具有獨特的效果，當前成為環(huán)境處理的重點產(chǎn)業(yè)之一?！ ∫?、真菌漆酶的微生物生產(chǎn) （一）菌種、試劑儀器及培養(yǎng)基 白腐菌（a公司；其它試劑都為分析純?！ 「邏簻缇仯粨u床；冷凍離心機；UV-1
3、800型紫外分光光度計?！ 。ǘ〤PDA培養(yǎng)基 綜合培養(yǎng)基（又稱cpda培養(yǎng)基）：馬鈴薯200克，葡萄糖20克，磷酸二氫鉀3克，硫酸鎂1.5克，維生素B110毫克，瓊脂18-20克，自來水1000毫升，pH5-6?！ 。ㄈ┚N的篩選 本文中白腐菌是從枯枝上采集而來，然后再進行白腐真菌的逐步篩選。在實際方案中，為了提高篩選的效率，菌種篩選方案常常將篩選分為初篩和復篩兩步完成[4]?！ ?.產(chǎn)漆酶的初篩 將采集來的枯枝，取其中的白色塊狀物，用無菌水來按不同濃度（102、103、104）進行稀釋，而且平行做三次。然
4、后采用平板涂布分離法，將不同梯度的菌樣分別接種到CPDA固體培養(yǎng)基上，在30℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每天觀察菌種的生長情況。通過平板涂布法篩選出單個優(yōu)良的菌落，用接種環(huán)進行反復的轉(zhuǎn)接，最后將所分離的菌株用CPDA試管斜面于5℃冰箱中保存。 2.產(chǎn)漆酶菌的復篩 將初篩得到的菌株平板種用打孔器取兩個直徑5mm的菌塞，接種到裝50mL產(chǎn)酶培養(yǎng)基的錐形瓶中，在30℃、150r/min振蕩培養(yǎng)50h，測定發(fā)酵液的粗酶活力。 ?。ㄋ模┓蛛x純化 先用快速定性濾紙過濾最優(yōu)發(fā)酵條件下的發(fā)酵液，獲得粗酶液，然后利用鹽析對粗酶液進行處理；再用
5、凝膠過濾進一步分離提純?！ 《⑵崦附到馊玖系难芯俊 “赘械拿甘且恍┹^為特殊的酶，人們常常用來它來降解木質(zhì)素以及其他難降解的一些物質(zhì)。特別是那些具有較高毒性、而不同結(jié)構(gòu)的、高分子難以降解的有機化合類物質(zhì)，如染料等[5]。 ?。ㄒ唬┢崦笇Φ逅{的脫色研究 1.pH值對靛藍脫色的影響 配制pH值分別為3.0～6.0的靛藍系列溶液，分別把等量酶液加入后混合均勻并且定容至50mL，完成脫色降解實驗。得到的數(shù)據(jù)如圖2-1中所示：脫色效果較好時pH值在4.0～5.0之間，脫色率可以到75%以上。且pH=4.5時，脫色率最高能
6、達82%。而pH≦4.0或pH≧6.0時，脫色的效果要差一些，因此我們認為漆酶在脫色降解靛藍反應(yīng)時的最佳pH值=4.5?！ ?.溫度對漆酶降解靛藍的影響 溫度在漆酶對靛藍脫色的影響如圖2-2。從圖中可以得到，在實驗過程中，隨著溫度逐漸升高，脫色的速度也逐漸加快，達到脫色平衡時間明顯縮短，但是在平衡的時候脫色率也會有降低。例如在50°C時，反應(yīng)經(jīng)過100min，脫色率可以達到80%以上；但在30-40°C時，反應(yīng)需要240min后才能使脫色率達到90%。我們選擇35°C作為漆酶降解靛藍的脫色溫度?！ 。ǘ┢崦笇鸪娶?/p>
7、的脫色研究 1.pH對漆酶降解金橙Ⅱ的影響 配制pH值從3.0～6.0的金橙Ⅱ染料溶液，進行染料的脫色降解實驗，結(jié)果以下圖2-3所示，脫色效果最好的時候溶液pH值為4.0～5.0范圍，脫色率可以達到93%以上。在pH=4.0時，脫色率為95.5%達到最高?！ ?.漆酶量對降解金橙Ⅱ的影響 在30°C，調(diào)整金橙Ⅱ溶液的pH值為4.0，使用不同濃度的漆酶溶液對金橙Ⅱ溶液進行降解脫色的實驗，結(jié)果見圖2-：漆酶（E.C.1.10.3.2）是一類含銅的氧化還原酶，常被稱為對苯二酚的氧化酶。本文討論白腐菌產(chǎn)漆酶的過程，漆酶對
8、靛藍和金橙Ⅱ在脫色氧化降解方面的研究，從實驗的數(shù)據(jù)我們得到：漆酶在氧化降解靛藍時最適合的pH=4.5，最佳溫度是30℃，用3.9IU/mL的漆酶來進行脫色降解反應(yīng)時，420min時脫色較完全，可以達90%；而漆酶氧化降解脫色金橙Ⅱ的適合的條件是pH=4.0，30℃，采用濃度為13.5IU/mL的漆酶處理含有金橙Ⅱ的溶液，反應(yīng)達50
