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1、膀胱癌抑癌基因Apaf：潘俊，陳凌武，王文衛(wèi)，瞿虎，王聲正【摘要】【目的】研究抑癌基因細胞凋亡蛋白酶活化因子-1(Apaf-1)和腺瘤性結腸息肉病相關基因(APC)的啟動子甲基化狀況與膀胱癌臨床病理的關系及對患者復發(fā)的影響?！痉椒ā坎捎眉谆禺愋訮CR方法檢測110例膀胱癌組織中Apaf-1和APC的啟動子甲基化狀態(tài)，以15例正常膀胱黏膜組織為對照組?！窘Y果】Apaf-1和APC基因在膀胱癌組織中的甲基化率為90.0%和82.7%，在正常膀胱組織為6.77%和20.0%，差異分別有統(tǒng)計學意義(P均=0.000)。Apaf-1及AP
2、C的甲基化率與腫瘤分化程度及臨床分期有明顯的相關性，隨腫瘤分級、分期的增加而升高。在復發(fā)組與未復發(fā)組的比較中，Apaf-1的甲基化陽性率分別為97.6%(41/42)和85.3%(58/68)，差異有統(tǒng)計學意義(χ2=4.382，P=0.036)，而APC的甲基化率分別為85.7%(36/42)和80.9%(55/68)，差異無統(tǒng)計學意義(χ2=0.424，P=0.515)。【結論】Apaf-1及APC的甲基化改變在膀胱癌的發(fā)生、發(fā)展過程中具有重要作用，Apaf-1啟動子甲基化可能成為膀胱癌患者預后判斷的分子標志物?！娟P鍵詞】膀胱癌
3、;甲基化;腫瘤抑制基因;Apaf-1;APC Abstract：【Objective】TostudytheApaf-1andAPCpromotermethylationstatusanditsrelationa.【Methods】MethylationstatusofApaf-1andAPCgenepromoterin110specimensofbladdercarcinomaand15normalbladdertissuesethylation-specificPCR.【Results】ThemethylationrateofA
4、paf-1andAPCa(90.0%，82.7%)thanthatofnormalbladdertissues(6.77%，20.0%)respectivelyethylationrateofApaf-1andAPCcorrelatedarespectively，increasedentoftumorgradesandstages.BetethylationratesofApaf-1ethylationstatusofApaf-1andAPCentofbladdercarcinoma，themethylationstatusofAp
5、af-1maybeeanearkerofprognosisinbladdercarcinoma. 目前普遍認為，在腫瘤轉化過程中抑癌基因功能的失活比原癌基因的激活起更關鍵作用，而DNA異常甲基化可直接修飾和關閉抑癌基因的功能。細胞凋亡蛋白酶活化因子-1基因(apoptoticproteaseactivatingfactor-1，Apaf-1)是c-Myc誘導腫瘤細胞凋亡中p53的下游成分，Apaf-1基因可以控制腫瘤的發(fā)展。已證實在白血病等惡性腫瘤中都出現(xiàn)了Apaf-1基因轉錄和翻譯水平的下調[1]，但在泌尿系腫瘤尤其是膀胱癌中有
6、關Apaf-1的研究報道相對較少[2]。SP法)檢測Apaf-1和APC基因在膀胱癌中的啟動子甲基化狀況，并分析其與膀胱癌臨床特點的關系及在患者術后復發(fā)監(jiān)測中的應用價值?！ ?材料和方法 1.1臨床資料 收集2001年1月至2005年12月在我院確診為膀胱移行細胞癌的患者的臨床資料，入選條件：①臨床資料完整。②蠟塊內(nèi)組織較大，可供提取DNA。篩選出150名患者，成功隨防到110患者，隨防成功率73.3%，其中男78例，女32例。手術時年齡36～72歲，平均62.5歲。病理分級按分期標準，淺表性(Tis～T1)48例，侵潤性腫瘤(
7、T2～T4)62例。另取15例正常膀胱粘膜組織常規(guī)石蠟包埋切片作對照組。15例正常膀胱粘膜組織標本均來自于行膀胱全切術時在離腫瘤邊緣5cm以外的無腫瘤組織，HE染色病理學檢查確認無腫瘤細胞?！ ?.2石蠟切片中DNA組織的提取 每個標本切取10μm厚度切片3～4張，無需脫蠟，直接用TaKaRaDEXPATTM試劑盒(大連寶生)，按步驟向石蠟包埋組織切片上加入TaKaRaDEXPATTM后，只需100℃加熱和4℃離心，就可以得到PCR擴增用DNA，紫外分光度儀確定DNA的含量和純度。 1.3甲基化特異性PCR分析 采用CPGen
8、omeTMDNAModificationKit試劑盒(Chemicon，USA)，對樣本DNA進行亞硫酸氫鈉修飾并純化回收，引物設計采用Primerpremier5.0引物設計專門軟件，由Invitrogen公司鑒定合成。Apaf-1
