曲古抑菌素a對膀胱癌t24細(xì)胞增殖及apaf

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1、曲古抑菌素A對膀胱癌T24細(xì)胞增殖及Apaf：王文衛(wèi)陳俊星潘俊肖峻林煥懿陳凌武【摘要】【目的】研究組蛋白去乙?；敢种苿┣乓志谹(TSA)對人膀胱癌T24細(xì)胞的增殖抑制作用及對Apaf-1、APC基因表達(dá)的影響?！痉椒ā坎捎?×10-4mmol/LTSA作用T24細(xì)胞，MTT法檢測TSA對T24細(xì)胞生長的抑制作用;流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測TSA作用前后T24細(xì)胞周期和凋亡的變化;逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)法檢測TSA作用前后膀胱癌細(xì)胞中Apaf-1、APCmRNA表達(dá)的變化?！窘Y(jié)果】TSA對T24細(xì)胞的生長具有明顯的抑制作用;TSA作用后T24細(xì)胞的G0/G

2、1期比例增加，S期比例減少，細(xì)胞凋亡率增加(P<0.05);RT-PCR結(jié)果顯示TSA處理能明顯誘導(dǎo)Apaf-1、APC基因表達(dá)增加?！窘Y(jié)論】TSA能抑制T24細(xì)胞體外生長，誘導(dǎo)細(xì)胞周期阻滯和凋亡，其可能通過誘導(dǎo)Apaf-1、APC基因表達(dá)增加而發(fā)揮體外抗膀胱癌作用?！娟P(guān)鍵詞】膀胱癌;曲古霉素抑菌素A;Apaf-1基因;APC基因　Abstract：【Objective】ToinvestigatetheeffectofTrichostatinA(TSA)，ahistonedeacetylaseinhibitor(HDACi)，onthegroanbladdercan

3、cercellsandtheexpressionofApaf-1andAPCinvitro，andtoexplorethepossiblemechanism.【Methods】T24cellsmol/LTSA;Aftertreatment，cellgroeasuredbyMTTassay;Cellapoptosischangesandthecellcycledistributioninedbyfloetry(FCM).TheexpressionofApaf-1andAPCmRNAetryshoentRNAlevelotedafterTSAtreatment.【Conclu

4、sion】TSAcaninhibitT24cellsgroightberelatedtotheexpressionofApaf-1andAPC.　　組蛋白乙?；揎検潜碛^遺傳調(diào)控最主要的研究內(nèi)容之一，其通過改變?nèi)旧|(zhì)的構(gòu)型調(diào)控基因轉(zhuǎn)錄，與惡性腫瘤具有密切的關(guān)系。抑制細(xì)胞內(nèi)組蛋白去乙?；?histonedeacetylase，HDAC)的活性，可增加組蛋白的乙?；潭龋哂幸种颇[瘤細(xì)胞的生長，誘導(dǎo)分化和(或)凋亡的作用[1]。曲古抑菌素(trichostatinA，TSA)是一種氧肟酸類HDAC抑制劑，本研究應(yīng)用TSA體外作用于人膀胱癌T24細(xì)胞株，觀察其細(xì)胞生物學(xué)行為改

5、變和人凋亡蛋白酶活化因子-1基因(apoptosisproteaseactivatingfactor-1，Apaf-1)、結(jié)腸腺瘤性息肉病基因(adenomatouspolyposiscoli，APC)表達(dá)的變化，探討TSA作用于膀胱癌的可能機制并為HDAC抑制劑應(yīng)用于膀胱癌治療提供理論依據(jù)?！　?材料和方法　　1.1細(xì)胞培養(yǎng)及主要試劑　　人膀胱移行細(xì)胞癌細(xì)胞株T24購于中國科學(xué)院上海生物細(xì)胞研究所，培養(yǎng)于含100mL/L胎牛血清、100U/mL青霉素100mg/mL鏈霉素的RPMI1640培養(yǎng)基。在37℃、體積百分比為5%CO2飽和濕度條件下生長傳代，實驗時取對數(shù)生長期

6、的細(xì)胞。TSA為美國Sigma公司產(chǎn)品，按說明配置成儲存液，用RPMI1640培養(yǎng)基稀釋成工作液。MTT、二甲基亞砜(DMSO)、碘化丙啶(PI)均購于廣州威佳生物公司，凋亡試劑盒(KGA108)購于南京凱基生物科技發(fā)展有限公司，Trizol試劑，Tag酶，逆轉(zhuǎn)錄酶M-MLV，RT-PCR試劑盒均購于Takara公司，　　1.2細(xì)胞增殖抑制實驗(MTT)測定TSA對T24細(xì)胞系增殖活性的影響　　取對數(shù)生長期，以臺盼藍(lán)檢測活力大于95%的T24細(xì)胞以104/孔密度接種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板，每孔體積200μL，細(xì)胞貼壁后以無血清培養(yǎng)基靜止24h，實驗組加入終濃度為3×10-4m

7、mol/LTSA，對照組加入等量的培養(yǎng)液，各組均設(shè)3復(fù)孔。置于37℃，體積分?jǐn)?shù)為5%CO2培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，分別于24h、48h、72h進(jìn)行處理，每孔加入5mg/mLMTT20μL/孔，37℃，體積分?jǐn)?shù)為5%CO2繼續(xù)孵育4h，小心吸棄上清，加入二甲基亞砜(DMSO)150μL/孔，充分混勻，于Bio-Tek酶標(biāo)儀分析490nm處吸光度值。用下面的公式計算抑制率：抑制率(%)=(1-實驗組吸光度值/對照組吸光度值)×100%?！　?.3流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測T24細(xì)胞周期變化　　取對數(shù)生長期的T24細(xì)胞按106/孔接種于6孔細(xì)胞