淺談曲古抑菌素a對膀胱癌t24細(xì)胞增殖及apaf1和apc基因表達(dá)的影響

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1、淺談???????????????作者：王文衛(wèi)陳俊星潘俊肖峻林煥懿陳凌武【摘要】?【目的】研究組蛋白去乙?；敢种苿┣乓志豠(tsa)對人膀胱癌t24細(xì)胞的增殖抑制作用及對apaf-1、apc基因表達(dá)的影響?！痉椒ā坎捎?×10-4mmol/ltsa作用t24細(xì)胞，mtt法檢測tsa對t24細(xì)胞生長的抑制作用;流式細(xì)胞術(shù)(fcm)檢測tsa作用前后t24細(xì)胞周期和凋亡的變化;逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(rt-pcr)法檢測tsa作用前后膀胱癌細(xì)胞中apaf-1、apcmrna表達(dá)的變化?！窘Y(jié)果】tsa對t24細(xì)胞的生長具有明顯的抑制作用;tsa作用后t24細(xì)胞的g0/g1

2、期比例增加，s期比例減少，細(xì)胞凋亡率增加(p<0.05);rt-pcr結(jié)果顯示tsa處理能明顯誘導(dǎo)apaf-1、apc基因表達(dá)增加?！窘Y(jié)論】tsa能抑制t24細(xì)胞體外生長，誘導(dǎo)細(xì)胞周期阻滯和凋亡，其可能通過誘導(dǎo)apaf-1、apc基因表達(dá)增加而發(fā)揮體外抗膀胱癌作用?！娟P(guān)鍵詞】?膀胱癌;曲古霉素抑菌素a;apaf-1基因;apc基因　abstract：【objective】toinvestigatetheeffectoftrichostatina(tsa)，ahistonedeacetylaseinhibitor(hdaci)，onthegrowthoft24humanb

3、laddercancercellsandtheexpressionofapaf-1andapcinvitro，andtoexplorethepossiblemechanism.【methods】t24cellsweretreatedwith3×10-4mmol/ltsa;aftertreatment，cellgrowthwasmeasuredbymttassay;cellapoptosischangesandthecellcycledistributionwereexaminedbyflowcytometry(fcm).theexpressionofapaf-1anda

4、pcmrnawasdetectedbyrt-pcr.【results】tsasignificantlyinhibitedtheproliferationoft24cells;flowcytometryshowedthatthecellsing0/g1phaseandtheapoptoticratesweresignificantlyincreasedaftertreatmentwithtsa，whilethecellsinsphasewerereduced.rt-pcrresultsshowedthattheapaf-1andapcmrnalevelwerepromot

5、edaftertsatreatment.【conclusion】tsacaninhibitt24cellsgrowthinvitrothroughinducingcellapoptosisandcellcyclearrest，whichmightberelatedtotheexpressionofapaf-1andapc.　　組蛋白乙?；揎検潜碛^遺傳調(diào)控最主要的研究內(nèi)容之一，其通過改變?nèi)旧|(zhì)的構(gòu)型調(diào)控基因轉(zhuǎn)錄，與惡性腫瘤具有密切的關(guān)系。抑制細(xì)胞內(nèi)組蛋白去乙?；?histonedeacetylase，hdac)的活性，可增加組蛋白的乙?；潭?，具有抑制腫瘤細(xì)胞的生長，

6、誘導(dǎo)分化和(或)凋亡的作用1。曲古抑菌素(trichostatina，tsa)是一種氧肟酸類hdac抑制劑，本研究應(yīng)用tsa體外作用于人膀胱癌t24細(xì)胞株，觀察其細(xì)胞生物學(xué)行為改變和人凋亡蛋白酶活化因子-1基因(apoptosisproteaseactivatingfactor-1，apaf-1)、結(jié)腸腺瘤性息肉病基因(adenomatouspolyposiscoli，apc)表達(dá)的變化，探討tsa作用于膀胱癌的可能機(jī)制并為hdac抑制劑應(yīng)用于膀胱癌治療提供理論依據(jù)?！　?材料和方法　　1.1細(xì)胞培養(yǎng)及主要試劑　　人膀胱移行細(xì)胞癌細(xì)胞株t24購于中國科學(xué)院上海生物細(xì)胞研

7、究所，培養(yǎng)于含100ml/l胎牛血清、100u/ml青霉素100mg/ml鏈霉素的rpmi1640培養(yǎng)基。在37℃、體積百分比為5%co2飽和濕度條件下生長傳代，實驗時取對數(shù)生長期的細(xì)胞。tsa為美國sigma公司產(chǎn)品，按說明配置成儲存液，用rpmi1640培養(yǎng)基稀釋成工作液。mtt、二甲基亞砜(dmso)、碘化丙啶(pi)均購于廣州威佳生物公司，凋亡試劑盒(kga108)購于南京凱基生物科技發(fā)展有限公司，trizol試劑，tag酶，逆轉(zhuǎn)錄酶m-mlv，rt-pcr試劑盒均購于takara公司，　　1.2細(xì)胞增殖抑制實驗(mtt)測定ts