克雷伯菌屬(肺炎克雷伯菌)生物安全評估報告.doc

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1、記錄表單編號：RFEHS-B01-017-R01生效日期：2015年8月15日修訂號：0頁碼：4/4EHS體系文件生物安全、輻射及化學品風險評價制度克雷伯菌屬（肺炎克雷伯菌）生物安全評估報告編制審核批準批準日期：年月日記錄表單編號：RFEHS-B01-017-R01生效日期：2015年8月15日修訂號：0頁碼：4/4EHS體系文件生物安全、輻射及化學品風險評價制度生物安全風險評價報告一、評價目的根據(jù)《實驗室生物安全通用要求》（GB19489-2008）、WHO《實驗室生物安全手冊》（第三版2004）、國務(wù)院《病原微生物實

2、驗室生物安全管理條例》、衛(wèi)生部令《人間傳染的病原微生物名錄》、CNAS-CL05：2009《實驗室生物安全認可準則》以及ZY-LIS-107《生物風險評估和風險控制程序》，微生物實驗室內(nèi)工作人員定期對本實驗室病原微生物檢測活動的生物安全進行評估。二、評價內(nèi)容1、概述肺炎克雷伯菌廣泛分布于自然界及人和動物的胃腸道內(nèi)，是臨床標本中常見的細菌，可引起典型的原發(fā)性肺炎，該菌在正常人鼻咽部的帶菌率1%~6%，但在住院病人中可高達20%。該菌是酒精中毒者、糖尿病人和慢性阻塞性肺部疾病患者并發(fā)肺部感染的潛在危險因素。肺炎克雷伯菌也能引

3、起各種肺外感染，包括腸炎和腦膜炎（嬰兒）、泌尿道感染（兒童和成人）及敗血癥。近十幾年來由該菌引起的免疫低下患者感染和醫(yī)院感染不斷增加，已成為社區(qū)感染和醫(yī)院感染的重要病原菌。其對抗生素的耐藥性也不斷增強。2、細菌的生物學特性肺炎克雷伯菌屬于腸桿菌科克雷伯菌屬，為革蘭氏陰性桿菌，無鞭毛、無芽胞，但有明顯的莢膜。兼性厭氧，對營養(yǎng)的要求不高。3、細菌的實驗室檢查及其它檢查3.1標本采集采自不同感染部位的各種標本，主要是痰標本。3.2分離培養(yǎng)將標本接種于血瓊脂和或MAC選擇性培養(yǎng)基，于37℃孵育過夜。可分別形成較大的、凸起、灰白色

4、粘液型的菌落以及MAC上紅色（易擴散至周圍的培養(yǎng)基中）、大而厚實、粘液型光亮的菌落。這些相鄰的菌落容易發(fā)生融合，用接種針沾取時常可挑出長絲狀的細絲。3.3染色鏡檢可見革蘭氏陰性桿菌，無芽胞，但在菌體外有明顯的莢膜。3.4生化鑒定該菌氧化酶陰性，發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣、動力陰性、吲哚陰性、鳥氨酸脫羧酶陰性、VP試驗陽性、脲酶陽性。3.5生長試驗該菌不能在5℃和10℃生長，但能41℃生長。3.6莢膜腫脹試驗可利用特異性的抗血清進行莢膜腫脹試驗以鑒別本菌屬及類似菌屬。將待測菌接種于華-弗（Worfel-Ferguson）培養(yǎng)基上（

5、有利于莢膜的產(chǎn)生），經(jīng)35℃、18~24h培養(yǎng)后，取一滴培養(yǎng)物加于載玻片上，加墨汁一滴或美藍液一滴，再加入抗血清1接種環(huán)，混合后加蓋玻片，置顯微鏡油鏡下觀察。在菌體周圍出現(xiàn)較大的空白圈者為陽性。該菌表現(xiàn)為陽性。3.7腸毒素測定對小兒腸炎患者除了要做菌種鑒定外，尚需做腸毒素測定以明確被檢菌的致病力。可用兔腸接扎試驗、細胞形態(tài)變化等方法測定。4、細菌的防治目前幾乎所有的肺炎克雷伯菌臨床分離株都攜帶有耐氨卞青霉素和羧卞青霉素的R質(zhì)粒，由于該菌對抗生素的耐藥性一直不斷增強，所以臨床一定要結(jié)合藥敏試驗的結(jié)果進行針對性用藥。該菌為條

6、件致病菌，易感人群主要是免疫功能較低下者。因此應(yīng)及時隔離治療患者，并作好家庭、社區(qū)和醫(yī)院的消毒。5、控制風險的措施5.1病原微生物風險分類4記錄表單編號：RFEHS-B01-017-R01生效日期：2015年8月15日修訂號：0頁碼：4/4EHS體系文件生物安全、輻射及化學品風險評價制度根據(jù)《病原微生物生物實驗室生物安全管理條例》中的有關(guān)規(guī)定，人間傳播的微生物名錄（待頒布）肺炎克雷伯菌屬于三類，BSL-2。5.2實驗活動中生物危害的預(yù)防措施。5.2.1實驗時，未經(jīng)實驗室主任同意，限制或禁止進入實驗室。5.2.2不許在工作

7、區(qū)域飲食、吸煙、清洗隱型眼鏡和化妝。食物應(yīng)存放在工作區(qū)域以外專用櫥柜或冰箱中。5.2.3所有的操作過程應(yīng)盡量細心，避免產(chǎn)生和濺出氣溶膠。5.2.4對于污染的銳器，必須時刻保持高度的警惕，包括針、注射器、玻片、加樣器等。5.2.5注射和吸取感染材料時，只能使用針頭固定注射器或一次性注射器（即注射器和針頭是一體的）。用過的一次性針頭必須彎曲、切斷、破碎、重新套上針頭套、從一次性注射器上去掉，或在丟棄前進行人工處理，要不將之小心放入不會被刺穿的、用于收集廢棄銳器的容器中。非一次性銳器必須放置在堅壁容器中，轉(zhuǎn)移至處理區(qū)消毒，最好

8、高壓殺菌。5.2.6打碎的器皿不能直接用手處理，必須用其它工具處理，如刷子和簸箕、夾子或鑷子。盛污染的針頭、銳器、碎玻璃的容器在倒掉前，應(yīng)按照相關(guān)的規(guī)定進行消毒。5.2.7所有的培養(yǎng)物、儲存物及其它規(guī)定的廢物在釋放前，均應(yīng)使用可行的消毒方法進行消毒，如高壓滅菌。轉(zhuǎn)移到就近實驗室消毒的物料應(yīng)置于耐用、防漏容器內(nèi)，密封運