黃芩苷抑制肝癌hepg

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1、黃芩苷抑制肝癌HepG：張學(xué)武崔長(zhǎng)旭陳麗艷全吉淑【摘要】　　目的觀察黃芩苷對(duì)肝癌HepG-2細(xì)胞增殖的影響。方法采用MTT比色法觀察黃芩苷抑制肝癌HepG-2細(xì)胞增殖；采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)黃芩苷對(duì)HepG-2細(xì)胞周期分布的影響。結(jié)果黃芩苷可抑制肝癌HepG-2細(xì)胞增殖，其作用具有時(shí)間和濃度依賴性；黃芩苷可誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，同時(shí)改變細(xì)胞周期分布，多數(shù)細(xì)胞阻滯于S期，與對(duì)照組比較，細(xì)胞凋亡率差異有顯著性。結(jié)論黃芩苷可誘導(dǎo)肝癌HepG-2細(xì)胞凋亡，改變細(xì)胞周期分布，從而抑制細(xì)胞增殖。【關(guān)鍵詞】黃芩苷細(xì)胞周期細(xì)胞凋亡　　A

2、bstract:ObjectiveToinvestigatetheinhibitionofbaicalinonproliferationhepatomaHepG-2cells.MethodsMTTassayinetheeffectofbaicalinontheproliferationofHepG-2cellandfloetrye-and-concentrationdependentmanner.Baicalincouldalsoinduceapoptosis,theSphasea公司；RPMI1640培養(yǎng)基

3、購自美國(guó)GIBCO公司；小牛血清購自北京華美生物工程公司；胰蛋白酶購自美國(guó)DIFCO公司；鼠抗bcl-2、p53單克隆抗體購自福州邁新生物有限公司?！　?.3儀器OLYMPUS倒置顯微鏡購自日本；RT-2100型酶標(biāo)儀購自美國(guó)；FACSCalibur流式細(xì)胞儀購自美國(guó)；JEM-1200EX透射電子顯微鏡購自日本；PD-2000真彩色病理細(xì)胞圖像分析儀購自北京天地百年科技公司?！　?方法　　2.1HepG-2細(xì)胞培養(yǎng)肝癌HepG-2細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)，培養(yǎng)于含10%滅活小牛血清，含100U/ml青霉素及100U/ml

4、鏈霉素的RPMI1640培養(yǎng)液中，置37℃、相對(duì)濕度90%、5%CO2孵箱內(nèi)培養(yǎng)?！　?.2HepG-2細(xì)胞形態(tài)的變化取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期HepG-2細(xì)胞按每瓶1×105個(gè)細(xì)胞接種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，24h后換液，加入含不同濃度（25，50，100μg/ml）黃芩苷的10%新生小牛血清RPMI1640培養(yǎng)液200μl，另設(shè)終濃度為25μg/ml5-Fu的陽性對(duì)照組和不加藥物的陰性對(duì)照組。置5%CO2孵箱內(nèi)培養(yǎng)24,48，72h。每天在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，48h時(shí)進(jìn)行常規(guī)HE染色?！　?.3MTT比色實(shí)驗(yàn)取

5、對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的HepG-2細(xì)胞按每孔1×105個(gè)細(xì)胞接種于96孔板中，每孔體積200μl。24h后換液，黃芩苷組加入黃芩苷使其終濃度分別為25，50，100μg/ml，另設(shè)終濃度為25μg/ml的5-Fu陽性對(duì)照組和不加藥物的陰性對(duì)照組以及不接種細(xì)胞的空白對(duì)照組。分別培養(yǎng)24，48，72h，每個(gè)濃度每個(gè)時(shí)點(diǎn)均設(shè)4個(gè)復(fù)孔。于終止前4h，每孔加入5mg/mlMTT溶液20μl，繼續(xù)孵育4h后棄去上清液，加入150μlDMSO，輕輕振蕩10min，使結(jié)晶物完全溶解，于490nm波長(zhǎng)處在熒光酶聯(lián)分析儀上測(cè)光吸收值(A值

6、)，計(jì)算抑制率(IR)?！　R(%)=(對(duì)照孔A值-實(shí)驗(yàn)孔A值)/對(duì)照孔A值×100%　　2.4流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡及細(xì)胞周期分布對(duì)照組和50μg/ml黃芩苷組細(xì)胞培養(yǎng)48h后，收集各組細(xì)胞懸液1ml，濃度約為106個(gè)/ml，離心（1000r/min,5min），棄掉培養(yǎng)液，70%冷乙醇固定，4℃PI暗染30min，流式細(xì)胞儀檢測(cè)，采用ModfitLT3.0軟件對(duì)各組樣本進(jìn)行DNA含量及細(xì)胞周期分析?！　?.5統(tǒng)計(jì)方法應(yīng)用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行相關(guān)性分析和方差分析，數(shù)據(jù)采用±s表示。　　3.1.2M

7、TT比色實(shí)驗(yàn)不同濃度處理組分別培養(yǎng)24，48h，黃芩苷對(duì)HepG-2細(xì)胞生長(zhǎng)有抑制作用，且其抑制作用具有時(shí)間和濃度依賴性。隨著時(shí)間的延長(zhǎng)和藥物濃度的增加，細(xì)胞抑制效果越明顯，藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)有量-效、時(shí)-效關(guān)系。當(dāng)黃芩苷濃度為50μg/ml作用時(shí)間為48h時(shí)，對(duì)HepG-2細(xì)胞的抑制率為51.241%，接近半數(shù)抑制濃度(IC50)。結(jié)果見表1~2?！　”?黃芩苷對(duì)HepG-2細(xì)胞生長(zhǎng)的影響（略）　　表2黃芩苷對(duì)HepG-2細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率（略）　　與同劑量組比較，*P<0.01；與同時(shí)間組比較，ΔP&l

8、t;0.01　　3.2黃芩苷對(duì)HepG-2細(xì)胞DNA含量的影響50μg/ml黃芩苷作用于HepG-2細(xì)胞48h后，經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測(cè)（圖1）可以看出加藥組細(xì)胞出現(xiàn)明顯的細(xì)胞凋亡峰，其凋亡率為27.01%，與對(duì)照組細(xì)胞的凋亡率5.47%相比差異有顯著性（P＜0.01）。結(jié)果見表3。　　圖1黃芩苷對(duì)HepG-2細(xì)胞DNA含量的影響(FCM)（略）　　3.3黃芩苷對(duì)HepG-2細(xì)胞周期的作用經(jīng)流式細(xì)胞儀分析