青蒿琥酯誘導(dǎo)凋亡的u937細(xì)胞負(fù)載樹(shù)突狀細(xì)胞后的免疫應(yīng)答

《青蒿琥酯誘導(dǎo)凋亡的u937細(xì)胞負(fù)載樹(shù)突狀細(xì)胞后的免疫應(yīng)答》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線(xiàn)閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫(kù)。

1、青蒿琥酯誘導(dǎo)凋亡的U937細(xì)胞負(fù)載樹(shù)突狀細(xì)胞后的免疫應(yīng)答：鄭智茵，王建峰，胡致平，沈建平，高瑞蘭，葉寶東，林圣云，沈一平【摘要】本研究探討凋亡白血病細(xì)胞負(fù)載的樹(shù)突狀細(xì)胞（dendriticcells,DC）能否誘導(dǎo)特異性細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞反應(yīng)。用青蒿琥酯誘導(dǎo)U937細(xì)胞凋亡,從正常人外周血單個(gè)核細(xì)胞誘生DC，將凋亡U937細(xì)胞負(fù)載DC,并添加TNFα誘導(dǎo)DC成熟,然后與自體T淋巴細(xì)胞共育,并聯(lián)合IL2以誘生細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞（CTL）；應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)分析DC和T細(xì)胞免疫表型,采用DextranFITC內(nèi)吞試驗(yàn)檢測(cè)DC的抗原攝取能力；用ELISA法檢測(cè)IL

2、12p70的產(chǎn)生；采用MTT法檢測(cè)凋亡U937細(xì)胞負(fù)載及未負(fù)載DC誘導(dǎo)的自體T淋巴細(xì)胞對(duì)不同的靶細(xì)胞（U937細(xì)胞和NB4細(xì)胞）的殺傷效應(yīng)。結(jié)果表明：青蒿琥酯1μg/ml作用于U937細(xì)胞48小時(shí)后,U937細(xì)胞的凋亡率達(dá)51.52%,DC在未成熟階段時(shí)吞噬DextranFITC的能力最強(qiáng)，負(fù)載凋亡U937細(xì)胞之后并不能促使未成熟DC（iDC）分化為成熟DC（mDC）。凋亡U937細(xì)胞負(fù)載后的iDC在TNFα的作用下能夠成為mDC。與未負(fù)載的mDC相比,凋亡U937細(xì)胞負(fù)載后的mDC（mDCApoU937）分泌IL12p70水平明顯增高,而且由其所激發(fā)

3、和擴(kuò)增的T細(xì)胞以CD8+的T細(xì)胞為主。細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)顯示:mDCApoU937誘導(dǎo)的T細(xì)胞的對(duì)U937細(xì)胞的殺傷顯著超過(guò)對(duì)NB4細(xì)胞的殺傷。結(jié)論：mDCApoU937能有效地誘導(dǎo)特異性抗白血病效應(yīng)?！娟P(guān)鍵詞】白血病ImmuneResponseofDendriticCellsCapturingAntigensfromApoptoticU937CellsInducedbyArtesunateAbstractTheobjectiveofstudyicimmuneactivity.TheapoptosisofU937cellsperipheralbloodmonon

4、uclearcellsofhealthdonorsaturationinthepresenceofTNFα.MaturedDCsphocytes,andbinediaspecificCTL.ThephenotypesofDCsandTlymphocytesetry.TheabilityofDCcapturingantigenseasuredbyDextranFITCendocytosis.TheIL12p70leveleasuredbyMTTassay.TheresultssholARTfor48hoursinvitro.DCshadthemostpo

5、maturephase.ApoptoticU937cellscouldnotinducethefeaturesofDCmaturation,andapoptoticU937cellpulsedimmatureDCscouldbematuredatureDCs（mDCApoU937）DC.TheproliferationofautologousTlymphocytescoculturedDCApoU937arkableandthecontentofCD8+CTLDCApoU937hadstrongerkillingeffectonU937cellsth

6、anNB4（p<0.01）.ItisconcludedthatthemDCApoU937caneffectivelygenerateTcellmediated　　青蒿琥酯誘導(dǎo)凋亡的U937細(xì)胞負(fù)載樹(shù)突細(xì)胞后的免疫應(yīng)答目前,以樹(shù)突狀細(xì)胞（DC）為基礎(chǔ)的免疫瘤苗已在淋巴瘤、黑色素瘤、腎癌等惡性腫瘤的臨床治療中獲得明顯療效,但針對(duì)急性白血病的治療尚處于探索階段。我們以健康正常人外周血單個(gè)核細(xì)胞的DC負(fù)載用中藥青蒿琥酯誘導(dǎo)凋亡的U937細(xì)胞作為研究模型,觀察凋亡的U937細(xì)胞負(fù)載DC刺激自體T細(xì)胞轉(zhuǎn)化為細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞（CTL）的能力,探討用凋亡的白血病細(xì)胞

7、負(fù)載DC作為DC疫苗的可能性。材料和方法主要試劑正常人外周血白細(xì)胞層由浙江省中心血站提供；人單核細(xì)胞白血病細(xì)胞株U937由本院血液病研究所提供；人急性早幼粒細(xì)胞白血病細(xì)胞株NB4由浙江大學(xué)腫瘤研究所提供；青蒿琥酯（artesunate,ART）為中國(guó)桂林第二制藥廠產(chǎn)品；rhGMCSF購(gòu)自廈門(mén)特寶生物股份有限公司；rhIL4和rhTNFα購(gòu)自美國(guó)PeproTech公司；rhIL2購(gòu)自沈陽(yáng)三生制藥股份有限公司；DextranFITC（4kD）購(gòu)自美國(guó)Sigma公司；IL12p70ELISAKit購(gòu)自法國(guó)Diaclone公司；PE/FITC標(biāo)記的鼠抗人C

8、D3、CD4、CD8單克隆抗體購(gòu)自美國(guó)