青蒿琥酯誘導hl60細胞凋亡的研究論文

《青蒿琥酯誘導hl60細胞凋亡的研究論文》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在工程資料-天天文庫。

1、青蒿琥酯誘導HL60細胞凋亡的研究論文劉俊玲，虞榮喜，陳均法【摘要】本研究旨在研究青蒿琥酯體外誘導HL60細胞凋亡及其過程中Bcl2與ICAD蛋白表達的變化。采用MTT法測定青蒿琥酯對HL60細胞的生長抑制作用；用光學顯微鏡檢、瓊脂糖凝膠電泳、流式細胞術觀察和檢測青蒿琥酯誘導HL60細胞的凋亡；應用蛋白印跡法檢測青蒿琥酯誘導HL60細胞凋亡過程中Bcl2與ICAD的表達變化情況。結果表明：青蒿琥酯對HL60細胞有明顯的生長抑制作用，并呈時間、劑量依賴性。48小時IC50值為18.33μg/ml，其

2、增殖抑制作用與誘導細胞凋亡有關；Bcl2和ICAD在HL60細胞中均有表達，且隨藥物濃度的增高表達量逐漸降低。結論：青蒿琥酯可誘導HL60細胞凋亡，Bcl2和ICAD在青蒿琥酯誘導HL60細胞凋亡的信號傳導途徑中可能是重要的調控因子?！娟P鍵詞】青蒿琥酯HL60細胞系細胞凋亡ApoptosisofHL60CellsInducedbyArtesunateInVitroAbstractThestudyedtoinvestigatetheeffectofartesunate(ART)ontheapoptos

3、isofHL60cellsinvitroandtheexpressionofBcl2andICADintheprocessofapoptosisinducedbyART.TheinhibitionofARTonHL60cellseansofMTTassay;cellapoptosisicroscopy,agarosegelelectrophoresis,floetry;I1640配制所需濃度；碘化丙啶（PI）、噻唑藍（MTT）為Sigma公司產(chǎn)品；細胞凋亡DNALadder提取試劑盒購自北京博大泰克生物基

4、因技術有限公司；bcl2和ICAD單克隆抗體均為美國SantaCruz公司產(chǎn)品。細胞系及細胞培養(yǎng)急性早幼粒細胞白血病細胞株HL60由浙江大學醫(yī)學院附屬第二醫(yī)院腫瘤研究所提供。細胞按常規(guī)懸浮細胞培養(yǎng)法培養(yǎng)于含10%熱滅活小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液中，置37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。每2-3天傳代1次，取對數(shù)生長期細胞進行實驗。MTT測定取對數(shù)生長期細胞，調整細胞濃度至1×105/ml，接種于96孔板，每孔100μl，青蒿琥酯終濃度分別為1、2、4、8、16、32、64及128μg/ml，每孔100μl，

5、設空白對照組。藥物分別作用24、48、72小時后，每孔加MTT20μl，于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4小時，離心棄去上清液，每孔加入DMSO150μl，振蕩搖勻，在570nm酶標儀上測吸光度值（A570），計算抑制率，求半數(shù)抑制濃度IC50。細胞抑制率（%）=（A對照－A實驗/A對照）×100%細胞經(jīng)對照組、給藥組作用48小時后，收集細胞，經(jīng)磷酸鹽緩沖液（PBS，pH7.4）洗2遍后，細胞制片機離心、制片，ulticycle2.50DNA分析軟件處理。Bcl2和ICAD表達的orphologicalchan

6、gesofHL60cellsinducedbyARTunderlightmicroscope.A:cellsinducedbyARTat16μg/mlfor48hours.B:control(:marker.Lane1:controlgroup.Lane2:8μg/mlgroup.Lane3:16μg/mlgroup.Lane4:32μg/mlgroup.細胞凋亡的流式細胞術檢測DNA的PI染色結果顯示：青蒿琥酯作用于HL60細胞48小時后出現(xiàn)亞二倍體峰（即細胞凋亡峰），且亞二倍體峰所占比例隨青蒿琥酯濃度的增

7、加而增加?？瞻讓φ战M及8、16和32μg/ml濃度實驗組的細胞凋亡率分別為6.40%、23.64%、54.45%和77.53%（圖3）。Bcl2和ICAD蛋白的表達Bcl2和ICAD在HL60細胞中均有表達，并且表達量較高。青蒿琥酯作用于細胞48小時后，隨著藥物濃度的增大，Bcl2和ICAD兩種蛋白的表達量逐漸降低（圖4）。討論細胞凋亡是生物體內廣泛存在的一種由細胞特定基因控制的細胞主動死亡過程，這一過程不僅存在于正常組織與器官，也存在于各種腫瘤組織，與腫瘤的發(fā)生、轉歸及抗腫瘤藥物的治療有密切關系。細胞凋

8、亡的檢測包括形態(tài)學、生物化學、免疫化學、組織化學和分子生物學等方面。我們對青蒿琥酯誘導HL60細胞凋亡進行了形態(tài)學、凋亡的定性定量、凋亡機制方面的研究。通過DNA電泳及流式細胞術檢測，結果提示青蒿琥酯是通過誘導HL60細胞凋亡而抑制其生長的。bcl2基因是血液系統(tǒng)惡性腫瘤中最為重要的拮抗凋亡的基因，主要位于核膜、粗面內質網(wǎng)和線粒體膜上［3］。bcl2可能通過抑制C