湖南石菖蒲水提液部位hplc特征指紋圖譜研究

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1、湖南石菖蒲水提液部位HPLC特征指紋圖譜研究趙曦1周曉東2(1吉林大學(xué)珠海學(xué)院519041;2珠海市食品藥品監(jiān)督管理局519000)【摘要】目的建立湖南石菖蒲水提液部位HPLC分析色譜條件，建立水提液部位標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。方法色譜條件:WatersCosmosilC18色譜柱(4.6mm×250mm，5μm);流動(dòng)相：甲醇:3%三乙胺(磷酸調(diào)PH到4.0)=56:44;檢測(cè)波長(zhǎng)：245nm;柱溫：28°C；流速：l.Oml/min;進(jìn)樣量：15μl。結(jié)果標(biāo)定共有指紋峰6個(gè)，峰型較好，峰面積穩(wěn)定，相似度均在0.9

2、0以上，與其他成分分離較好。結(jié)論方法準(zhǔn)確性可靠，重現(xiàn)性好，可用于石菖蒲藥材水提液部位的指紋圖譜研究。【關(guān)鍵詞】石菖蒲水提液指紋圖譜HPLC【中圖分類號(hào)】R282.71【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A【文章編號(hào)】2095-1752(2012)15-0023-03石菖蒲來(lái)源于天南星科Araceae菖蒲屬Acorus植物石菖蒲AcorustatarinowiiSchott的干燥根莖，根莖中主要含有揮發(fā)油，故多重視其揮發(fā)油成分的研究。但根據(jù)近年來(lái)有關(guān)石菖蒲水提液部位現(xiàn)代藥理研宄的報(bào)道，其開竅豁痰、醒神益智、化濕和胃的功效并不局限于揮發(fā)油部位。有研宄表明石

3、菖蒲水提液對(duì)抗抑郁［1］、抗癲癇［2］及小鼠嗎啡依賴戒斷［3］具有一定療效。木文所用石菖蒲來(lái)源于湖南，采用水蒸氣蒸餾法，去除揮發(fā)油得到水提液部位，二極管陣列對(duì)最佳檢測(cè)波長(zhǎng)進(jìn)行篩選，確定相關(guān)色譜條件，建立湖南石菖蒲水提液部位特征指紋圖譜，報(bào)道如下。一材料1,樣品來(lái)源樣品收自湖南邵東縣藥農(nóng)，產(chǎn)自附近丘陵，海拔約200米，分為個(gè)子貨及飲片，帶少量泥土，完整者根莖分叉，數(shù)量2?5個(gè)不等；表皮紅棕色，粗糙，節(jié)1.5?3cm;斷面微紅色，內(nèi)皮層環(huán)紋明顯，可見(jiàn)維管束小點(diǎn)及棕色油點(diǎn)；氣芳香，香氣濃。經(jīng)珠海市藥監(jiān)局主任藥師、廣州中醫(yī)藥大學(xué)客座教授周

4、曉東鑒定為天南星科植物石菖■的干燥根莖。采收吋間及規(guī)格見(jiàn)表1:表110批湖南石菖蒲藥材采收時(shí)間及規(guī)格1,儀器與藥品美國(guó)Agilent1200series二極管陣列檢測(cè)器；日本島津LC-2010A高效液相相色譜儀；甲醇：色譜純，購(gòu)于天津四友生物醫(yī)學(xué)技術(shù)有限公司；三乙胺：分析純，購(gòu)于廣州化學(xué)試劑廠；磷酸：分析純，購(gòu)于廣州化學(xué)試劑廠；正丁醇：分析純，購(gòu)于廣州化學(xué)試劑廠；水：超純水。二方法1，色譜條件WatersCosmosilC18柱(4.6mm×250mm，5μm)；流動(dòng)相：甲醇：3%三乙胺(磷酸調(diào)PH到4.0)=5

5、6:44；檢測(cè)波長(zhǎng)：245nm；柱溫：28°C;流速：l.Oml/min；進(jìn)樣量：15μl；指紋圖譜采集時(shí)間60min。2,供試品溶液的制備，取藥材5g,粉碎成1?2cm的粗粒，加20倍量的水，水蒸氣蒸榴法提取揮發(fā)汕10小吋，棄去揮發(fā)油，收集水提液部分，濾過(guò)，濾液減壓濃縮至1.10?1.15(50°C),用等量水飽和正丁醇提取4次，合并正丁醇液，減壓回收正丁醇，殘留物真空干燥(-6.86Kpa,70°C),用水溶解，定容到10ml量瓶中，0.45μm微孔濾膜過(guò)濾，進(jìn)樣15μl。3,方法學(xué)考察為了考察分析方法的可靠

6、性，選取編號(hào)2、3、4的樣品，分別對(duì)其儀器精密度、穩(wěn)定性和實(shí)驗(yàn)方法重復(fù)性作了相應(yīng)考察。(1)精密度試驗(yàn)取供試品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，相似度值均為1.000,各共冇峰的相對(duì)保留吋間和相對(duì)保留峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)小于3%,結(jié)果表明儀器精密度良好。(1)穩(wěn)定性試驗(yàn)取供試品溶液，分別于配制后Oh、12h、24h、48h進(jìn)樣，相似度值均在0.990?1.000之間，各共奮峰的相對(duì)保留吋間和相對(duì)保留峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）小于3%，結(jié)果表明供試品溶液在室溫下放置48h穩(wěn)定。（3）重現(xiàn)性試驗(yàn)將同一藥材樣品按2.2項(xiàng)下依法制成5份進(jìn)

7、樣，相似度值均為1.000，各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)保留峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）小于3%,結(jié)果表明重現(xiàn)性良好。三HPLC指紋圖譜的建立1，參照物的選擇取批號(hào)為09032801的石菖蒲藥材，按2.2項(xiàng)下配制供試品溶液，在上述色譜條件下，進(jìn)樣分析，得到HPLC指紋圖譜，見(jiàn)圖1。由圖可見(jiàn)保留吋間為20.2min的色譜峰，峰高最高，峰型較好，峰面積穩(wěn)定，與其他成分分離較好，因此本研宄選擇該峰作為參照物（S）。圖1湖南石菖蒲水提液部位參照物圖譜2,對(duì)照譜圖的生成及共有指紋峰的標(biāo)定取批號(hào)09032801?09032810的10批湖南

8、石菖蒲藥材，按2.2項(xiàng)下配制供試品溶液，按上述考察的色譜條件進(jìn)行分析，得到HPLC指紋圖譜，見(jiàn)圖2。將圖譜導(dǎo)出，用《中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)2004A版》生成對(duì)照指紋譜圖。生成方法：平均數(shù)法；吋間窗寬度：0.10。結(jié)果見(jiàn)圖3:圖210批湖南石