中藥蛇六谷提取物對人肝癌hepg2細胞增殖的抑制作用及其機理的初步研究

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1、ofextractsofwaterwereindistinctively.(2).TheextractofpetroleumetherandethylacetateofRhizomaAmorphophallihaveeffectontheproliferationofcellHepG2,withatime-effectcurve.(3).TheextractofpetroleumetherofRhizomaAmorphophallishowedthattheextracthaseffectofinduceapoptosisoftu

2、morcell.KeywordChineseherbaldrugs，AmorphophallusKonjac.K.Koch，hepaticcancer，cell proliferation，cellapoptosis萬方數(shù)據(jù)前言惡性腫瘤是威脅人類健康的重要疾病。近50年來，我國癌癥的發(fā)病率一直處于上升階段，癌癥占居民死亡原因的19%，為常見死亡原因之首。根據(jù)世界衛(wèi)生組織報告，2000年全球癌癥死亡例數(shù)已超過700萬，占全部死亡人數(shù)的12%，預(yù)期2020年每年新發(fā)病例數(shù)將達1500萬。由于環(huán)境污染、生活習(xí)慣等因素影響，專家預(yù)計在20

3、25年前癌癥總發(fā)病率不可能下降[1]。因此，癌癥預(yù)防與治療，將是一場長期戰(zhàn)役?，F(xiàn)代腫瘤的四大療法為：手術(shù)、放射治療、化學(xué)治療及生物治療[1]。前三者建立于19世紀末和20世紀初，生物治療建立于20世紀80年代。四大療法的出現(xiàn)在一定程度上為腫瘤患者帶來了福音，但說要完全攻克癌癥尚為時過早。但隨著科學(xué)不斷發(fā)展，不少新療法、新藥物逐漸面市，為腫瘤的徹底治愈帶來了希望。近年來，從傳統(tǒng)中藥及復(fù)方制劑中提取活性成分和活性部位已成為發(fā)現(xiàn)抗腫瘤新藥的一條重要途徑。即運用“中藥化學(xué)組學(xué)”（TCMChemics）[2]，將中藥作用的物質(zhì)基礎(chǔ)用能代表其

4、功能的一組化學(xué)成分來詮釋。目前，全球應(yīng)用的抗腫瘤藥物中已有一半左右的藥物，其化學(xué)結(jié)構(gòu)來自天然產(chǎn)物，如已開發(fā)出的目前臨床廣泛使用的提取成分紫杉醇、喜樹堿等。我國有應(yīng)用天然中草藥的悠久歷史，更積累了豐富的臨床經(jīng)驗。因此，應(yīng)用現(xiàn)代藥物篩選方法開發(fā)高效低毒的天然中草藥抗腫瘤有效部位與活性成分具有得天獨厚的優(yōu)勢。蛇六谷，又名“魔芋”、“蒟蒻”、“翦頭”、“由跋”等，最早收錄于《神農(nóng)本草經(jīng)》，為天南星科魔芋屬(Amorphophallus)多年生草本植物的塊莖。據(jù)考證，浙江地區(qū)藥用“蛇六谷”為AmorphophallusrivieriDuri

5、e[3]?，F(xiàn)代醫(yī)家認為其辛、寒、有毒，內(nèi)服有化痰散積，行瘀消腫等功效[4]，《中藥大辭典》記載它為一種常用的抗腫瘤中藥?，F(xiàn)代廣泛用于治療各種惡性腫瘤，有軟堅散結(jié)、解毒抗癌作用，在腫瘤轉(zhuǎn)移時，往往更重用該藥。上海群力草藥店曾總結(jié)70年來收方用藥經(jīng)驗，發(fā)現(xiàn)在收集的118張治癌驗方中，使用蛇六谷者占70%，其中腦轉(zhuǎn)移、骨轉(zhuǎn)移者使用率100%，并以君藥出現(xiàn)。其它使用蛇六谷者以膽囊癌、胰腺癌、肺癌、乳腺癌、惡性淋巴瘤為主[5]。故蛇六谷是江浙地區(qū)最有特色的常用抗癌中藥之一。查閱60年代以來有關(guān)蛇六谷（魔芋）研究的國內(nèi)外文獻，蛇六谷（魔芋）抗

6、癌有效成分研究報道較少。魔芋塊莖中主含魔芋精粉，其成分主要為葡甘露聚糖（KGM），此外還含有蛋白質(zhì)、淀粉、果糖、蔗糖、葡萄糖和甘露糖等[4,6]。在報道的藥理研究中，萬方數(shù)據(jù)多以魔芋精粉或魔芋葡甘露聚糖為研究對象，認為其有抑癌、解除便秘、降脂、降糖、減肥等多種功效[7-9]。魔芋精粉為食品魔芋商品的原料，為鮮魔芋塊莖削皮、切塊、研粉后加工而成；葡甘露聚糖僅是蛇六谷的一種化學(xué)成分。而臨床使用的蛇六谷為魔芋塊莖的帶皮飲片，其藥理作用可能與魔芋精粉或葡甘露聚糖有一定差別[10、11]。因此，我們認為蛇六谷的抗癌有效成分值得深入研究。另外

7、蛇六谷的抗癌療效原理及其主要作用靶點，也值得深入研究。本試驗在前期研究的基礎(chǔ)上，選擇浙江地區(qū)治療腫瘤常用藥物——蛇六谷為具體研究對象，選取人肝癌HepG2細胞株為實驗瘤株。擬以系統(tǒng)溶劑法初步提取分離蛇六谷的不同成分，以體外細胞實驗方法篩選其活性部位，以生長曲線法觀察其不同成分的時間－效應(yīng)曲線，并從誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡角度探討其抗腫瘤作用的可能機理，為進一步闡明該藥作用的物質(zhì)基礎(chǔ)和機理提供科學(xué)的理論依據(jù)。萬方數(shù)據(jù)實驗研究一、材料與方法（一）實驗材料1.實驗室浙江中醫(yī)藥大學(xué)中藥化學(xué)實驗室浙江中醫(yī)藥大學(xué)分子生物與遺傳研究室浙江省中醫(yī)院中心實

8、驗室2.實驗細胞株人肝癌HepG2細胞株，購自中國科學(xué)院上海細胞生物學(xué)研究所。3.實驗儀器SHZ-D（Ⅲ）循環(huán)水式真空泵鞏義市英谷予華儀器廠SENCOR-201旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上海中順生物科技有限公司AR2130電子精密天平美國Ohaus公司DGG-90