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《探討dna防齲疫苗黏膜免疫防齲可行性及不同免疫途徑對免疫效果的影響》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、探討DNA防齲疫苗黏膜免疫防齲可行性及不同免疫途徑對免疫效果的影響-->【摘要】醫(yī)學(xué)技術(shù)論文目的:觀察編碼pac結(jié)構(gòu)基因A-P片段的重組質(zhì)粒pCIA-P以不同途徑免疫BALB/c小鼠后的特異性免疫反應(yīng)。方法:重組質(zhì)粒pCIA-P經(jīng)鼻腔滴注和頜下腺區(qū)皮下腺注射兩種途徑免疫小鼠,ELISA法檢測血清和唾液中特異性抗體水平動態(tài)變化。結(jié)果:滴鼻法和皮下注射法免疫后唾液IgA型特異性抗體和血清IgG型特異性抗體均明顯升高,并持續(xù)數(shù)周。且滴鼻法比皮下注射法誘導(dǎo)唾液IgA型特異性抗體要早。結(jié)論:重組質(zhì)粒pCIA-P是一種有效的免疫原,滴鼻法和頜
2、下區(qū)皮下注射法接種防齲DNA疫苗都可有效誘導(dǎo)機體全身及局部黏膜免疫應(yīng)答。而滴鼻法較皮下注射法能更早誘導(dǎo)局部黏膜免疫應(yīng)答。【關(guān)鍵詞】DNA疫苗;變形鏈球菌;齲齒;Pac；防齲疫苗 變形鏈球菌是齲病的主要致病菌,其表面蛋白質(zhì)抗原PAc是其主要毒力因子之一,參與介導(dǎo)細菌對牙面的黏附[1],抗Pac抗體能有效抑制S.mutans的致齲能力。研究發(fā)現(xiàn),PAc分子內(nèi)的2個高度保守區(qū)為該蛋白的黏附功能區(qū)和免疫活性區(qū)[2,3]。本實驗利用構(gòu)建的DNA防齲疫苗pCIA-P免疫小鼠,檢測血清及唾液中特異性抗體水平及其動態(tài)變化,探討DNA防齲疫苗黏膜
3、免疫防齲可行性及不同免疫途徑(滴鼻、頜下腺區(qū)皮下注射)對免疫效果的影響。1 材料和方法1.1 DNA疫苗質(zhì)粒pCIA-P為武漢大學(xué)口腔醫(yī)學(xué)院中心實驗室構(gòu)建,攜帶有pac基因A區(qū)到P區(qū)1全長A-P基因片段。pCI真核表達質(zhì)粒為美國Promega公司產(chǎn)品。所有質(zhì)粒采用堿裂解法和聚乙二醇分級沉淀法提取和提純。1.2 實驗動物及分組處理湖北省醫(yī)學(xué)科學(xué)院動物飼養(yǎng)中心的6~8周齡雌性BALB/c小鼠20只。將BALB/c小鼠隨機分為4組,每組5只。A組,pCIA-P鼻腔滴注;B組,pCIA-P頜下腺區(qū)皮下注射;C組,pCI鼻腔滴注;D組,生理
4、鹽水鼻腔滴注。每只小鼠每次免疫劑量為100μg/只,2周后加強免疫1次。1.3 唾液和血清的收集每只小鼠腹腔注射2g/L毛果蕓香鹼(7.5μg/100g),用Eppendorf管收集全唾液,離心,樣本置于-20℃保存。采用眶后靜脈穿刺法取血法收集血清,4℃過夜,樣本于-20℃保存。于首次免疫后第2周開始收集樣本,每2周收集1次。1.4 血清和唾液中抗體水平的檢測[2]酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)檢測特異性抗體水平。10μg/mL的純化抗原PAc標準品(日本Kyushu大學(xué)牙學(xué)院TakahikoOho教授贈)包被96孔板,30mL
5、/L牛血清白蛋白封閉,滴加100μL待測血清(PBST1∶10稀釋)和唾液樣本(PBST1∶5稀釋),37℃溫育2h,分別加入100μL(1∶1000)堿性磷酸酶標記的羊抗鼠IgG和羊抗鼠IgA(美國Sigma公司)。底物顯色,酶聯(lián)檢測儀測A405值。1.5 統(tǒng)計學(xué)分析采用SPSS軟件進行統(tǒng)計學(xué)處理。均數(shù)采用方差分析,兩均數(shù)間的兩兩比較運用q檢驗。2 結(jié)果2.1 唾液中IgA型抗PAc抗體水平的觀察A組在免疫后第2周唾液抗PAc-IgA開始升高,水平明顯高于C組(陰性對照組)及D組(空白對照組),差異有顯著性(P0.05)。B組在
6、免疫后第6周唾液抗PAc-IgA開始升高,水平高于C組及D組,差異有顯著性(P0.05)。在抗體水平最高點,A組和B組抗PAc-IgA水平無明顯差異(P>0.05)。C組和D組抗PAc-IgA水平在各時間點均無明顯變化(P>0.05)。2.2 血清中IgG型抗PAc抗體水平的觀察A組在免疫后第2周血清中抗Pac-IgG開始升高,水平明顯高于C組和D組,差異有顯著性(P0.05)。3 討論變形鏈球菌是公認的致齲菌,其表面蛋白抗原PAc被證實與介導(dǎo)細菌與牙面獲得性膜之間的黏附過程,重組真核表達質(zhì)粒pCIA-P攜帶有Pac蛋白編碼基因中
7、免疫功能區(qū)域的A-P片段。研究表明[4]抗Pac抗體能有效抑制S.mutans的致齲能力,本研究用pCIA-P免疫BALB/c小鼠,發(fā)現(xiàn)其能夠誘導(dǎo)產(chǎn)生血清和唾液中特異性抗Pac抗體,與空白組及陰性組比較,差異有顯著性(P-->不清楚。DNA疫苗pCIA-P以BALB/c小鼠為模型采用鼻黏膜和頜下腺區(qū)皮下注射法接種都能夠誘導(dǎo)產(chǎn)生唾液中抗PAc-IgA和血清中抗Pac-IgG,即有效誘發(fā)機體產(chǎn)生局部黏膜免疫反應(yīng)和系統(tǒng)免疫反應(yīng)。這兩種免疫途徑都是DNA疫苗主動免疫防齲有效措施。而鼻黏膜免疫方法比頜下腺區(qū)皮下注射法能更快誘導(dǎo)產(chǎn)生唾液中保護
8、性特異抗體SIgA,并可持續(xù)較長時間,而且該方法簡單易行,是相對安全有效的黏膜免疫途徑?！?/p>
