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《淺議白藜蘆醇誘導腫瘤細胞凋亡和細胞周期阻滯的功能及機制》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、淺議白藜蘆醇誘導腫瘤細胞凋亡和細胞周期阻滯的功能及機制：朱青，張***，王立鋒，王芳，楊安鋼【白藜蘆醇Resveratrolinducedapoptosisandcellarrestincancercells 【AbstractAIM:TostudythemechanismofresveratrolinducedHepG2andK562cellsapoptosisandcellarrest.METHODS:CellmorphologicalmethodandAnnexinVtechnologyetry(FCM)edicinesensitivityofHepG2andK562cells.
2、RESULTS:ApoptosisanlivercancerHepG2celltreatedatinecondensationandfragmentationentationeanddosedependenteffectsofresveratroltoHepG2cellentofhumanlivercancereanddosedependenteffect.Theresveratrolinducedcellapoptosisisspecifictocancercells. 【Keya公司,溶于二甲基亞砜（DMSO,購于Sigma公司）,濃度稀釋為5×106mol/L,-20℃?zhèn)溆?RP
3、MI1640和新生牛血清購自Invitrogen公司.MTT購于華美生物工程公司，溶于1×PBS（10mmol/L,pH7.4）使?jié)舛葹?g/L，0.22μm的微孔過濾除菌后4℃?zhèn)溆?DNA熒光染料(PI和AnnexinV)購于Coulter公司，4℃?zhèn)溆? 1.2方法 1.2.1細胞培養(yǎng)人肝癌1×105HepG2和慢粒K562細胞培養(yǎng)于含100mL/L新生牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液中，加進1×105ｕ/L青霉素,100mg/L鏈霉素,置于孵箱，在37℃,50mL/LCO2飽和濕度的條件下培養(yǎng)，實驗時取對數(shù)生長期細胞. 1.2.2形態(tài)學觀察以5,10,20,50和100μmol
4、/LRES功能細胞，24~72h后免疫相差顛倒顯微鏡下觀察HepG2和K562細胞形態(tài)變化情況. 1.2.3AnnexinV熒光染色檢測細胞凋亡收集1×106細胞(HepG2細胞在收集前已用AnnexinV5μL37℃孵育10min),PBS洗2遍，800～1000r/min離心5min，棄上清，加進預冷的結(jié)合緩沖液重懸細胞，加進5μLPI和5μLAnnexinV于細胞懸液中（每份樣品均設(shè)立凋亡細胞陰性對照和陽性對照,以調(diào)整樣品檢測的最佳工作電壓和雙色熒光補償）,輕輕混勻后4℃避光染色10min，流式細胞術(shù)（FCM)分析. 1.2.4FCM檢測細胞周期收集1×106細胞,PBS洗2遍
5、，800~1000r/min離心5min，棄上清，加進1mL生理鹽水制成單細胞懸液.加進預冷的無水乙醇2mL快速混勻，固定細胞.棄固定液，PBS洗2遍，1000r/min離心5min，加進1mLDNA熒光染料PI，4℃避光染色15min，F(xiàn)CM分析. 1.2.5四唑藍比色法（MTT）檢測RES對細胞生長的影響收集細胞，將細胞重新接種至96孔板中，使其每孔細胞數(shù)為1×103~1×104個，分別以20,50和100μmol/LRES功能細胞，加進100mL/L新生牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液培養(yǎng).于加藥后24,48和72h進行檢測.每孔加進MTT溶液20μL,37℃繼續(xù)培養(yǎng)4h后棄上清，
6、每孔加進150μLDMSO溶解樣品,用酶聯(lián)免疫檢測儀測定各孔490nm吸光度值，計算均值，繪制生長曲線. 2結(jié)果 2.1RES功能后腫瘤細胞形態(tài)的變化經(jīng)RES5～100μmol/L功能后，免疫相差顛倒顯微鏡下可見HepG2細胞典型凋亡細胞形態(tài)學特征：細胞體積縮小，胞質(zhì)濃縮，胞核固定，染色體凝集，有的形成凋亡小體.隨功能時間延長可見壞死細胞增多，表現(xiàn)為細胞腫脹，破碎（Fig1，2）.但K562細胞無明顯變化. 2.2RES對細胞周期的功能RES功能于K562細胞和HepG2細胞48h時，F(xiàn)CM檢測細胞周期雖無明顯細胞周期G1期前subG1峰，但K562細胞G1期細胞數(shù)占檢測細胞的百分
7、比為50.72%,G2期為22.81%,凋亡率為0.59%；HepG2細胞G1期為67.75%,G2期為13.69%,凋亡率為9.97%.由此檢測到RES功能后HepG2細胞周期明顯被阻止于G1期. 2.3RES功能后腫瘤細胞的凋亡不同濃度的RES對K562細胞凋亡無明顯功能，而對HepG2細胞凋亡功能較為明顯，凋亡和壞死共存.隨著時間的延長壞死逐漸增多.AnnexinV熒光染色檢測HepG2細胞凋亡率最高為13.7%（Fig3）
