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《白藜蘆醇誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期阻滯的作用及機(jī)制》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫(kù)。
1、白藜蘆醇誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期阻滯的作用及機(jī)制作者：朱青，張王剛，王立鋒，王芳，楊安鋼【關(guān)鍵詞】白藜蘆醇Resveratrolinducedapoptosisandcellarrestincancercells 【Abstract】AIM:TostudythemechanismofresveratrolinducedHepG2andK562cellsapoptosisandcellarrest.METHODS:CellmorphologicalmethodandAnnexinVtechnologyetry(FCM)edicinesensitivityofHepG2an
2、dK562cells.RESULTS:ApoptosisanlivercancerHepG2celltreatedatinecondensationandfragmentationentationeanddosedependenteffectsofresveratroltoHepG2cellentofhumanlivercancereanddosedependenteffect.Theresveratrolinducedcellapoptosisisspecifictocancercells. 【Keya公司,溶于二甲基亞砜（DMSO,購(gòu)于Sigma公司）,濃度稀釋為5×
3、106mol/L,-20℃?zhèn)溆?RPMI1640和新生牛血清購(gòu)自Invitrogen公司.MTT購(gòu)于華美生物工程公司，溶于1×PBS（10mmol/L,pH7.4）使?jié)舛葹?g/L，0.22μm的微孔過(guò)濾除菌后4℃?zhèn)溆?DNA熒光染料(PI和AnnexinV)購(gòu)于Coulter公司，4℃?zhèn)溆? 1.2方法 1.2.1細(xì)胞培養(yǎng)人肝癌1×105HepG2和慢粒K562細(xì)胞培養(yǎng)于含100mL/L新生牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液中，加入1×105ｕ/L青霉素,100mg/L鏈霉素,置于孵箱，在37℃,50mL/LCO2飽和濕度的條件下培養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)時(shí)取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞. 1.2.
4、2形態(tài)學(xué)觀察以5,10,20,50和100μmol/LRES作用細(xì)胞，24~72h后免疫相差倒置顯微鏡下觀察HepG2和K562細(xì)胞形態(tài)變化情況. 1.2.3AnnexinV熒光染色檢測(cè)細(xì)胞凋亡收集1×106細(xì)胞(HepG2細(xì)胞在收集前已用AnnexinV5μL37℃孵育10min),PBS洗2遍，800～1000r/min離心5min，棄上清，加入預(yù)冷的結(jié)合緩沖液重懸細(xì)胞，加入5μLPI和5μLAnnexinV于細(xì)胞懸液中（每份樣品均設(shè)立凋亡細(xì)胞陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照,以調(diào)整樣品檢測(cè)的最佳工作電壓和雙色熒光補(bǔ)償）,輕輕混勻后4℃避光染色10min，流式細(xì)胞術(shù)（FCM)分析.
5、 1.2.4FCM檢測(cè)細(xì)胞周期收集1×106細(xì)胞,PBS洗2遍，800~1000r/min離心5min，棄上清，加入1mL生理鹽水制成單細(xì)胞懸液.加入預(yù)冷的無(wú)水乙醇2mL快速混勻，固定細(xì)胞.棄固定液，PBS洗2遍，1000r/min離心5min，加入1mLDNA熒光染料PI，4℃避光染色15min，F(xiàn)CM分析. 1.2.5四唑藍(lán)比色法（MTT）檢測(cè)RES對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響收集細(xì)胞，將細(xì)胞重新接種至96孔板中，使其每孔細(xì)胞數(shù)為1×103~1×104個(gè)，分別以20,50和100μmol/LRES作用細(xì)胞，加入100mL/L新生牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液培養(yǎng).于加藥后24,
6、48和72h進(jìn)行檢測(cè).每孔加入MTT溶液20μL,37℃繼續(xù)培養(yǎng)4h后棄上清，每孔加入150μLDMSO溶解樣品,用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀測(cè)定各孔490nm吸光度值，計(jì)算均值，繪制生長(zhǎng)曲線. 2結(jié)果 2.1RES作用后腫瘤細(xì)胞形態(tài)的變化經(jīng)RES5～100μmol/L作用后，免疫相差倒置顯微鏡下可見HepG2細(xì)胞典型凋亡細(xì)胞形態(tài)學(xué)特征：細(xì)胞體積縮小，胞質(zhì)濃縮，胞核固定，染色體凝集，有的形成凋亡小體.隨作用時(shí)間延長(zhǎng)可見壞死細(xì)胞增多，表現(xiàn)為細(xì)胞腫脹，破碎（Fig1，2）.但K562細(xì)胞無(wú)明顯變化. 2.2RES對(duì)細(xì)胞周期的作用RES作用于K562細(xì)胞和HepG2細(xì)胞48h時(shí)，F(xiàn)CM
7、檢測(cè)細(xì)胞周期雖無(wú)明顯細(xì)胞周期G1期前subG1峰，但K562細(xì)胞G1期細(xì)胞數(shù)占檢測(cè)細(xì)胞的百分比為50.72%,G2期為22.81%,凋亡率為0.59%；HepG2細(xì)胞G1期為67.75%,G2期為13.69%,凋亡率為9.97%.由此檢測(cè)到RES作用后HepG2細(xì)胞周期明顯被阻止于G1期. 2.3RES作用后腫瘤細(xì)胞的凋亡不同濃度的RES對(duì)K562細(xì)胞凋亡無(wú)明顯作用，而對(duì)HepG2細(xì)胞凋亡作用較為明顯，凋亡與壞死共存.隨著時(shí)間的延長(zhǎng)壞死逐漸增多.AnnexinV熒光染色檢測(cè)HepG2細(xì)胞凋亡率最高為13.7%（F
