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《c型產(chǎn)氣莢膜梭菌α》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、C型產(chǎn)氣莢膜梭菌α：韓學(xué)波，于欣，廖國玲，謝琴，曾瑾，王玉炯【摘要】 目的研究含α-β2-β1融合基因的重組菌株BL21(DE3)(pXETAB2B1)的免疫原性。方法用重組菌株BL21(DE3)(pXETAB2B1)制備包涵體和全細(xì)胞培養(yǎng)物兩種抗原，采用氫氧化鋁膠體作為免疫佐劑，免疫ICR小白鼠，用C型產(chǎn)氣莢膜梭菌外毒素粗提物進(jìn)行攻毒，觀察小鼠的保護(hù)情況。結(jié)果包涵體加氫氧化鋁凝膠制備的抗原保護(hù)效果對于1LD100和2LD100的攻毒均達(dá)到100%；全細(xì)胞培養(yǎng)物加氫氧化鋁凝膠制備的抗原保護(hù)效果對于1LD100和2LD100的攻
2、毒達(dá)到50%和20%。結(jié)論已獲得具有一定免疫原性重組菌株，可作為預(yù)防C型產(chǎn)氣莢膜梭菌所致疾病的候選菌株?！娟P(guān)鍵詞】C型產(chǎn)氣莢膜梭菌融合蛋白免疫保護(hù) Abstract：ObjectiveToexploretheimmunogenicityofalphatoxin、beta2toxinandbeta1toxinfusiongeneintherebinantstrainBL21(DE3)(pXETAB2BZ)ofClostridiumperfringenstypeC.MethodsInclusionbodyandthestrainc
3、ultureofrebinantstrainBL21(DE3)(pXETAB2BZ)adeandthealuminumhydroxidehydrateandFreund'sadjuvantousemunizedperfringenstypeC.Immunogenicityoftherebinantstrainice.ResultsImmunizationinumhydroxidegelcouldprotectICRmousefromthechallengeof1LD100and2LD100.Theprotectiverateof
4、thestrainculturecontainingaluminumhydroxidegelthechallengeof1LD100and2LD100respectively；TheinclusionbodyandthestrainculturecontainingFreund'sadjuvantthechallengeof2LD100ofClostridiumperfingensCtypetoxin.ConclusionTherebinantstrainBL21(DE3)(pXETAB2BZ)hadimmunogenicity
5、andcouldbeusedascandidatestrainofvaccination. KeyperfringenstypeC；protectiveantigen；immunogenicityt C型產(chǎn)氣莢膜梭菌(Clostridiumperfringens)，又稱魏氏梭菌(C1L，完全混合均勻后雙層紗布過濾2次，1.05×105Pa高壓滅菌60min備用?！ ?.4菌種的復(fù)壯 在預(yù)先準(zhǔn)備好的含50mg/mLKan的LB平板上，接種環(huán)劃線凍存的BL21(DE3)(PXETAB2BZ)菌種，倒置于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)12～
6、16h后，挑取單個(gè)菌落，接種于含50mg/mL卡那霉素的LB液體培養(yǎng)基中，于37℃振蕩培養(yǎng)12～16h后備用?！ ?.5免疫用抗原的制備 1.5.1包涵體粗提物抗原的制備 將IPTG誘導(dǎo)5h的50mL培養(yǎng)物離心收集菌體，然后重懸于0.5mL1%Tris-HCl-2mmol/LEDTA中，加入溶菌酶至終濃度100μg/mL，再加入0.5mL1%TritonX-100，于30℃溫浴15min。超聲波處理10s后再超聲波處理10s，12000r/min離心15min，收集的沉淀物即為包涵體粗提物。將該包涵體重溶于20mL的生理鹽水
7、中，超聲波處理10s后再超聲波處理10s，12000r/min離心15min，收集沉淀重溶于6mL的生理鹽水中，分裝于6支離心管中，備用?！ ⒅苽涞陌w粗提物1支用滅菌生理鹽水10倍稀釋后，加入氫氧化鋁凝膠至終濃度10%，經(jīng)無菌檢驗(yàn)后作為免疫用抗原?！ ?.5.2重組菌全細(xì)胞培養(yǎng)物抗原的制備 挑取LB平板的單個(gè)菌落，接種于5mL含30μg/mLKan的LB試管中，于37℃振蕩過夜。次日取1mL接種于100mL含Kan的LB三角瓶中(1%接菌量)，于37℃振蕩16～24h后加入0.8%甲醛滅活3d后，取50mL按10%加入氫
8、氧化鋁凝膠佐劑，經(jīng)無菌檢驗(yàn)后作免疫用抗原?！ ?.6免疫接種實(shí)驗(yàn) 取小鼠50只，隨機(jī)分成5組，每組10只(每組雌雄各5只)，第一組和第二組皮下注射用包涵體加鋁膠制備的抗原(0.5mL)，第三組和第四組皮下注射含工程菌全細(xì)胞培養(yǎng)物加鋁膠制備的抗原(0.5mL)，
